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第九章 微生物的遗传变异与育种 第一节 遗传变异的物质基础 第二节 微生物的基因突变 第三节 微生物的基因重组 第四节 微生物与基因工程 第五节 微生物的菌种选育 第六节 微生物菌种的保藏与复壮 第五节 微生物的菌种选育  良好的菌种是微生物发酵工业的基础 在微生物工业应用中， 微生物菌种工作主要包括以下四方面： ① 菌种的分离筛选：挑选符合生产要求的菌种，这是选种工作的任务。 ② 菌种培育： 改良已有菌种的生产性能，使产品的质和量不断提高，或使它更适应于工艺的要求，这是育种工作的任务。 ③ 菌种的保藏： 一切生产菌种都要使它避免死亡和生产性能的下降，这是菌种保藏工作的任务。 ④ 退化菌种的复壮： 如果发现菌种的生产性能下降，就要设法使它恢复，这便是菌种复壮工作的任务。 自发突变与育种 （1）从生产中选育 在日常生产中微生物会以一定频率发生自发突变。此时可以抓住良机选育优良的生产菌种。 （2）定向培养优良菌种 定向培育一般是指用某一特定环境长期处理某一微生物培养物，同时不断对它们进行移种传代，是达到积累和选择合适的自发突变体的一种古老的育种方法。培育新种的过程十分缓慢。 诱变育种 利用物理或化学诱变剂处理均匀分散的微生物细胞群，促进其突变频率大幅度提高，然后简便、快速和高效地筛选少数符合育种目的的突变株。 一、自然界工业菌种筛选程序 ???? 我国幅员辽阔，各地气候条件、土质条件、植被条件差异很大，这为自然界中各种微生物的存在提供了良好的生存环境。自然界中微生物种类繁多，估计不少于几十万种，但目前已为人类研究及应用的不过千余种。 选用最适剂量 诱变剂剂量一般指强度与作用时间的乘积。各种诱变剂有不同的剂量表示方式，如化学诱变剂以一定温度下诱变剂的浓度和处理时间来表示。在育种实践中，常以杀菌率来作诱变剂的相对剂量。 诱变剂的合适剂量：凡在提高诱变率的基础上，能扩大变异幅度，促使变异移向正变范围的剂量，就是合适的剂量。 要确定一个合适的剂量，常常要经过多次试验。就一般微生物而言，在一定的剂量范围内，突变率往往随剂量的增高而提高，但正变较多出现在偏低的剂量中，而负变则较多出现在偏高的剂量中；还发现经多次诱变而提高产量的菌株中，更容易出现负变。因此，在诱变育种工作中，目前大家比较倾向于采用较低的剂量。 选择简便有效的诱变剂： 物理诱变剂：紫外线、激光；X射线、γ射线和快中子等。 化学诱变剂：主要有烷化剂、碱基类似物和丫啶类化合物。 拟辐射物质：有些烷化剂例如氮芥、硫芥和环氧乙烷等除了能诱发各种点突变外，还能诱发一般只有辐射才能诱发的染色体畸变，所以它们也被称为拟辐射物质。 由于一切生物的遗传物质基础都是核酸尤其是DNA，所以任何能改变核酸结构的因素都可引起核酸生物学功能的改变。同样，凡能引起核酸的其他功能改变的因素，一般也能引起突变。 4.2 筛选方法 一般通过初筛与复筛对突变株进行生产性能的测定。 初筛既可在培养皿平板上进行，也可在摇瓶中进行，两者各有利弊。 复筛是对突变株的生产性能作比较精确的定量测定。一般是将微生物摇瓶培养，然后再对培养液进行分析测定。 不仅需要设计效率更高的筛选方法，还应努力推广筛选操作的自动化。 (2)营养缺陷型突变株的筛选(P152) 与筛选营养缺陷型突变株有关的三类培养基 基本培养基（MM，minimal medium）：仅能满足某微生物的野生型菌株生长需要的最低成分组合培养基，称基本培养基。可用符号“[－]”来表示。 完全培养基（CM，complete medium）：凡可满足一切营养缺陷型菌株营养需要的组合培养基，可称为完全培养基。可用符号“[＋]”。 补充培养基（SM，supplemental medium）：凡只能满足相应的营养缺陷型生长需要的组合培养基，称为补充培养基。补充培养基的符号可根据加入的是A或B等代谢物而分别用[A]或[B]等来表示。 与营养缺陷突变有关的三类遗传型个体 野生型：从自然界分离到的任何微生物在其发生营养缺陷突变前的原始菌株。 营养缺陷型：野生型菌株经诱变处理后，丧失了某酶的合成能力，只能在加有该酶合成产物的培养基中生长，这类突变称为营养缺陷型突变株（简称营养缺陷型）。 原养型：营养缺陷型突变经回变或重组后产生的菌株，营养要求在表型上与野生型相同。 营养缺陷型的筛选方法（见P152～154） 诱变剂处理 淘汰野生型（抗生素法、菌丝过滤法） 检出缺陷型（夹层培养法、限量补充培养法、逐个检出法、影印培养法） 鉴定缺陷型（生长谱法） 诱变剂处理 目前在实践上常用的诱变剂主要有： 紫外线 氮芥 硫酸二乙酯