第九章—核酸分子杂交(上)周琳.pptVIP

② 显色反应 酶法：通过酶促反应使其底物形成有颜色的反应产物 碱性磷酸酶 辣根过氧化物酶 DAB（二氨基联苯胺）→红棕色 TMB（四甲基联苯胺）→蓝色 第三节 核酸分子杂交技术 印迹杂交 核酸原位杂交 液相印迹杂交 固相杂交 是将电泳分离的待测DNA片段固定在固相载体上，与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的位置上显示杂交信号的方法。 一、传统的核酸分子杂交技术 1、Southern 印迹杂交 提取DNA 限制性内切酶消化 琼脂糖凝胶电泳 碱变性 转移到NC膜，高温烘烤 与DNA探针杂交 放射自显影 基本步骤 预杂交 图 虹吸印迹法 与Southern Blotting不同的是：1. 不需要限制性核酸酶切; 2. 变性方法不是碱变性，而是采用聚乙二醛和二甲基亚砜、甲醛、甲基氢氧化汞等方法。 检测靶分子为RNA RNA极易被环境中存在的RNase 降解，提取时要特别注意RNase 污染问题。 2、Northern 印迹杂交 3、斑点杂交与狭缝杂交 将RNA或DNA变性后直接点样或用狭缝点样器加样于硝酸纤维素膜或尼龙膜上，再用探针进行杂交，这样的方法称为称为斑点杂交（dot blotting）或狭缝杂交(slot blotting)。 dot blotting slo