杨荣武生物化学第七章核酸的性质及研究方法.pptVIP

提要 一、核酸的理化性质 二、核酸研究的技术和方法 核酸的化学合成 核酸的分离、纯化和定量 三、核酸一级结构的测定 DNA一级结构的测定 RNA一级结构的测定 核酸变性在一定条件下也是可逆的。当各种变性因素不复存在的时候，变性时解开的互补单链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象称为复性。热变性DNA 一般经缓慢冷却后即可复性，此过程被称为退火。 伴随着DNA复性的是其浮力密度和紫外吸收的减少、粘度的增加和生物活性的恢复，其中紫外吸收减少的现象被称为减色效应。 影响DNA复性的因素有温度、离子强度、DNA浓度和DNA序列的复杂度等。 酸水解 核酸分子内的糖苷键和磷酸二酯键对酸的敏感性不同：糖苷键＞磷酸酯键；而嘌呤糖苷键＞嘧啶糖苷键 碱水解 RNA的磷酸二酯键对碱异常敏感，得到2′-或3′-核苷酸的混合物；DNA对碱的作用并不敏感，其抗碱水解的生理意义在于作为遗传物质的DNA应更稳定，不易水解。而RNA（主要是mRNA）是DNA的信使，完成任务后应该迅速降解。 酶促水解 核酸的抽取 两种核蛋白的分离 蛋白质的去除 核酸的沉淀 电泳 离心 层析 核酸的纯度的检测和定量 原理：是用特殊的化学试剂，处理待测的具有末端放射性同位素（32P）标记的单链DNA或者只有一条链的末端被放射性同位素标记的双链DNA片段，造成特定碱基的修饰、脱落和戊糖-磷酸骨架被特异性切割，从而产