绿僵菌的杀蚜潜力评价和球孢白僵菌、绿僵菌及其玫烟色拟青霉的孢子疏水性相关特征的解析及其利用.pdfVIP

摘 要 白僵菌、绿僵菌和拟青霉等常见丝孢类昆虫病原真菌是害虫微生物防治的重要资 源。菌株分生孢子对靶标害虫的毒力以及孢子疏水特性是孢子制剂研制中要考虑的两 个重要因素。前者决定真菌制剂的生防潜力，后者决定孢子对昆虫体壁的吸附，并影 Persicae)的生防潜 响孢子的水相分散效果。本研究评价了23株绿僵菌对桃蚜(Myzus bassiana)、绿僵菌 力，筛选出一批高效杀蚜菌株；系统测定了球孢白僵菌(Beauveria (Metarhizium 疏水性，揭示了孢子大小、孢壁疏水蛋白含量与孢子疏水性之间的关系，提出了在孢 子悬乳剂设计中根据孢子疏水性优化孢子制剂配方和应用效果的策略。主要内容和结 果分述如下： 绿僵菌对桃蚜的毒力测定 挑选地理和寄主来源不同的23株绿僵菌株，包括金 龟子绿僵菌Manisopliae，金龟子绿僵菌金龟子变种ManisopIiaevar．anisopliae，金 龟子绿僵菌蝗变种Manisopliae vat． Persicae进行平均 flavoviridevar．minus，对桃蚜Myzus majus及黄绿绿僵菌小孢种M 为11．5、99和1179个孢子／mm2的低、中、高剂量处理的生物测定，每处理3次重复， 每重复为甘蓝叶片上的成蚜40～50头，对照为含0．02％吐温80。采用标准喷塔法接种， 一死亡率模型模拟分析。结果表明，所有供试菌株对桃蚜都有致病性，高接种剂量下 的累计死亡率为O．8～95．3％。其中的10株绿僵菌在高剂量下的死亡率超过50％。根据 模型模拟产生的剂量效应和时间效应参数计算出这些菌株对桃蚜的致死中剂量LC50 的剂量下，各菌株的LT50收敛至4天以内。此外，对供试菌株蚜尸显症率的观察发现， 此6株菌致死的蚜尸有80％以上都产生大量分生孢子，显示出较佳的流行潜力。这是 关于绿僵菌对蚜虫生防潜力的首次评价。 孢子疏水性与孢子大小的关联在改良的水／油分层体系中评价了48株绿僵菌、 球孢白僵菌和玫烟色拟青霉的疏水率飓，疏水率变化范围在59．7～92．2％，不同菌种或 同一菌种的不同菌株间均存在显著差异。平均疏水率在绿僵菌高达83．3％，白僵菌为 78．6％，拟青霉为72．5％。所有菌株的单孢表面积也存在极显著差异，7．9,-,25．3 p,m2不 等。其中，绿僵菌的平均单孢表面积()为14．4+3．8 p,m2，显著大于球孢白僵菌的10．1± 1．1lam2和玫烟色拟青霉的9．0+0．9岬2，而后两者之间差异不显著。相关性分析显示， 可归因于其孢子大小的不同。孢子表面积与孢子密度之间呈显著的逆相关(r2=O．95)， 表明等重的不同菌株孢子粉的含孢量因孢子大小而异，是孢子制剂设计中需要考虑的 重要因素。 孢子疏水性与三氟乙酸可溶孢壁蛋白含量的关联选择6株孢子大小和疏水率均 冰浴进行分步抽提。抽提物经SDS．PAGE电泳分析显示，TFA可溶蛋白组份明显有别 kDa。 于SDS和FA抽提且可溶的孢壁蛋白组份，其蛋白条带稀少，分子量为10～14 经扫描电镜观察和疏水率检测发现，孢壁表面疏水蛋白组成的短棒层的消失，仅发生 在TFA抽提(绿僵菌)或FA抽提(白僵菌和拟青霉)之后，且孢壁短棒层的消失伴随着孢 子疏水性的巨降。由于白僵菌和拟青霉孢子的FA抽提物中沉淀经TFA进一步处理后 才溶于2％SDS，且白僵菌的TF’A解离物与其己知疏水蛋白Hydl(13．81kDa)和Hyd2 (11．98 kDa)的多克隆抗体呈阳性反应，由此推测三种菌的三氟乙酸可溶(TFAS)的孢壁 蛋白组份就是孢壁疏水蛋白，而绿僵菌和玫烟色拟青