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常规输血的忧患 8.2 血红蛋白的结构和功能 Hb的组成与结构 影响血氧亲和力的因素 H+和CO2浓度增加促进氧分子的释放(快速) Hb(H+ ) +4O2 Hb（O2）4+H+ Hb(CO2)n +4O2 Hb（O2）4+nCO2 2，3-DPG作为别构效应物降低脱氧血红蛋白对氧的亲和力。（代谢生成，反应较慢） Hb-2,3-DPG +4O2 Hb（O2）4+2,3-DPG 血红蛋白氧解离曲线 8.3 血液代用品的类型 全氟碳化合物 8.3.2血红蛋白类血液代用品 8.3.2血红蛋白类血液代用品 初次离心后的结果 次洗涤后的结果 利用透析袋透析 装配好的凝胶柱 收集得到的纯化后的蛋白 无基质血红蛋白（ SFH) 1）因SFH在血浆中很快从四聚体分解为二聚体或单体，易于通过肾脏，故其半衰期过短，仅2h-4h左右； 2)SHF失去了2，3-DPG类物质的变构作用，其氧亲和力明显升高(氧离曲线P50下降)，故不利于向组织细胞释放氧； 3)因SFH可滤过至肾小管管腔，而高浓度的蛋白类物质可引起管腔堵塞，导致肾功能受损； 4)SFH具有胶体性质，在血浆中可产生胶体渗透压(COP)，在其血浆浓度与全血相同时，COP可达全血的2倍，故在常规应用时，其浓度最高只能在7 g％； (5)Hb易氧化成高铁Hb(MetHb)，失去携氧能力并产生自由基。 血红蛋白类血液代用品 分子内交联血红蛋白 分子内交联 磷酸吡哆醛(PLP)是2，3-DPG的结构类似物，可使Hb β亚基的氨基端Val吡哆醛化； 与Hb β亚基的2,3-DPG结合位点形成共价键可以降低氧亲和力； 但由此形成的四聚体不稳定。为了克服PLP的缺点。人们后来合成了含有2个吡哆醛的双醛基衍生物，降低天然Hb的氧亲合力并阻止其解聚。 双阿司匹林交联（DCL-Hb) 3，5-二溴水杨酸在与琥珀酸或延胡索酸连接后形成双阿司匹林(DBBF)，成为血红蛋白赖氨酸的氨基共价交联的碳桥。 DBBF对脱氧血红蛋白修饰效果较好，为α-α交联，可产生一种稳定的、高协同性和低氧亲和力的双阿司匹林交联Hb(DCL-Hb)，其功能特征与人血液很相似， DCLHb Hemolink 多聚血红蛋白 化学修饰存在的问题 脂质体包封血红蛋白 脂质体包封血红蛋白工艺的发展 脂质体包封血红蛋 基因重组血红蛋白（rHb) 血液代用品发展现状（一） 血液代用品发展现状（二）P176 血红蛋白的制备 交联过程 步骤： 1）高纯度血红蛋白的制备； 2）取浓缩的血红蛋白溶液，用50mM的PBS(pH7)稀释，超滤膜浓缩至血红蛋白终浓度2g/Dl,置于反应釜中，然后加入溶有40mM DSS的DMSO溶液，DSS与血红蛋白的质量比为10：1，在N2保护下反应1h; 3)反应后用超滤膜浓缩并更换生理缓冲液，操作温度为4℃。 开环的棉籽糖交联 棉子糖（三糖）经高碘酸氧化为含6个醛基的开环化合物； 进行交联。 王雁峰等报道。 思考题： 血红蛋白的修饰方法有哪些？各有什么优缺点？ 参考文献 1、《生物技术药物》 马大龙 科学出版社 2、《基因工程药物》 李元 化学工业出版社 (4)透析： ①过程：取1ml的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/l的磷酸缓冲液中（pH为7.0），透析12小时。②透析目的：除去样品中分子量较小的杂质。 原理：透析袋能使小分子自由进出，而大分子保留在袋内。 透析过程动画演示 凝胶分离纯化 注意：正确的加样操作是：1、不要触及并破坏凝胶面。2、贴壁加样。3、使吸管管口沿管壁环绕移动。 血红蛋白的化学修饰 目的： 稳定血红蛋白4聚体结构，增加蛋 白相对分子量，以达到降低毒性 的作用。 原理： 表面有许多可修饰的功能基团 类型：分子内交联血红蛋白、多聚血红蛋 白、共轭血红蛋白、脂质体包封血 红蛋白；基因重组血红蛋白 图8-3 血红蛋白的修饰方法 8.3.3 化学修饰血红蛋白（第二代血液代用品） 方法 交联血红蛋白 聚合血红蛋白 共轭连接血红蛋白 血红蛋白的化学修饰 血红蛋白肽链间的交联，降低氧的亲和力。 试剂：含有负电基团并能结合在血红蛋白中心 腔位置，如双阿司匹林类化合物（3， 5-二溴水杨基双延胡索酸酯），吡哆醛 类化合物。 产品：美国Baxter公司的DCLHb、加拿大 Hemosol公司的