端粒酶在肾脏表达与在肾脏缺血再灌注损伤修复过程中作用及研究.pdf

复旦大学博士研究生论文 中文摘要 端粒酶在肾脏的表达及其在肾脏 缺血再灌注损伤修复过程中的作用研究 目的：端粒酶可以维持端粒体长度，防止细胞衰老，在胚胎干细胞中高度表 达，但除部分成体干细胞(如造血干细胞)外，成年体细胞内几乎已无端粒酶的 粒酶阳性细胞在肾脏的表达和肾损伤后变化，并求证端粒酶阳性表达能否成为肾 脏成体干细胞的标志，进一步明确急性肾损伤修复的机制，以寻求指导急性肾损 伤治疗的理论基础。 方法：(一)利用历胁卜GFP转基因小鼠，通过肾小管标记物(AQPl、AQP2、 PER和TRAP 等)荧光共染定位端粒酶阳性细胞(GFP+)；通过real—time ificationProtoc01)PCRE1 (Telomeric isa定量检测端粒酶基 RepeatAmpl 周成年后处死，仍保留BrdU标记的细胞为进入缓慢细胞周期的细胞 Label一retaining 夹闭双侧肾动脉30min，再通，制作小鼠双侧肾动脉缺血再灌注损伤(I／R)模 型，分为假手术组(sham)、术后1天、2天、3天共4组，每组6只，分别取肾 标本，同样用PER和TRAP法检测肾损伤修复过程中端粒酶基因和酶活性的变化； (四)利用历衙卜GFP转基因小鼠，建立单侧肾脏I／R模型，并在术后肾损伤 R26LacZ两种转基因小鼠，通过谱系追踪和细胞周期标记研究肾缺血再灌注损伤 修复过程中mTert细胞的再生和迁移。 结果：(一)生理状态下，端粒酶基因主要表达在成年小鼠肾脏乳头和内髓部 位，保持较高的酶活性。成年历胁卜GFP转基因小鼠的肾脏mTert表达与GFP保持 阳性的小管)，而在近曲小管和间质没有表达。(二)观察BrdU标记的肾乳头， 周期的LRC，这些细胞也散在分布于集合管和髓袢。(三)raTer堪因于肾损伤后 4 复旦大学博士研究生论文 48h在肾乳头的表达明显上调，有统计学意义(PO．05)，但在髓质和皮质的表 达无显著变化。双侧肾损伤后24h和48h，肾乳头处端粒酶活性也显著升高，有统 计学意义(P0．05)。(四)为证明急性肾损伤后端粒酶阳性细胞的作用，IRI 最严重的外髓和皮质未出现GFP+细胞显著增加。(五)为追踪mTert+上皮细胞在 并未标记BrdU。 结论：本研究首次报道了端粒酶在成年小鼠肾脏中的表达主要集中于肾乳头 和内髓，定位于肾脏集合管和髓袢上皮细胞。在急性肾损伤时端粒酶活性和基因 表达均上调，可能对肾脏有保护作用，但表达端粒酶的细胞并未明显增生，参与 损伤后修复。 关键词：端粒酶，干细胞，肾乳头，急性肾损伤，再生修复 中图分类号：R692．5 复旦大学博士研究生论文 Abstract TheTelomerase inRenal ExpressionEpithelia Ischemia anditsFunctionalafterRenal Analysis u ReperfusionInjry 一 一 一 for telomere enzyme maintaininglen