《动物细胞工程》课件.pptVIP

动物细胞工程常用的技术手段： 动物细胞培养、 动物细胞核移植、 动物细胞融合、 单克隆抗体 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 动物细胞培养和核移植技术 动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 动物细胞生长特性： 细胞贴壁： 将动物细胞在液体培养基中培养，悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 注意：癌细胞失去了接触抑制 动物细胞培养条件： 1、无菌、无毒的环境 （①培养液和所用培养用具进行无菌处理②添加一定量的抗生素③定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。） 血清主要提供一些激素和生长因子 3、温度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） O2是细胞代谢所必需；CO2的主要作用是维持培养液的PH值 动物细胞培养应用 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体） 作为基因工程中的受体细胞 人造皮肤 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性 为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据 二、动物体细胞核移植技术: 1、概念 将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物 3.诱导融合的因素 生物法：灭活的病毒诱导融合.(利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。 这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。) 化学法：聚乙二醇PEG诱导融合. 物理法：电激融合 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振动、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物、动物细胞融合的比较 1.其由何种细胞产生？ 2.主要分布在哪里？ 3.如何得到抗体？ 知识回顾：1.什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 2.B淋巴细胞与抗体的关系： ①B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。 ②动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 ③每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。 3.传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？ 怎样解决这个问题？ 将抗原反复注射到动物体内，然后从动物 血清中分离 4.缺陷： 产量低，特异性差，纯度低 5.解决方法： 采用单个B淋巴细胞进行无性 繁殖，形成细胞群，产生化学性质单一， 特异性强的抗体。 ①思路：⑴要获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群 ⑵将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合 ②将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的原因： ⑴一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体 ⑵B淋巴细胞不能无限增殖，而小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖。 杂交 细胞 灭活的病毒等手段 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 经免疫的小鼠 提取 杂交瘤细胞 第一次筛选 用特定的选 择性培养基 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞 体外培养 注射到小鼠腹腔 提取单克隆抗体 过程总结： 1.B细胞实际上是 2.单克隆抗体的制备过程经过几次筛选？其目的是什么？ 浆细胞 两次； 第一次筛选的目的是：获得杂交瘤细胞； 第二次筛选的目的是：获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。 3.细胞融合后培养液中有几种细胞,如何筛选? BB B瘤 瘤瘤 ①细胞融合后培养液中有几种细胞 筛选杂种细胞 已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但一般不分裂增值。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加PEG促融，获得杂种细胞。 第二次筛选： 在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。 4.单克隆杂交瘤细胞的特点： ①具有两个亲本的遗传物质 ②产生特异性抗体 ③