《基于S蛋白检测猪流行性腹泻抗体间接ELISA方法的建立 Prokaryotic Expression of PEDV S Protein and Development of Indirect ELISA for Detection of Its Antibody》.pdfVIP

河南农业科学，2013，42(8)：119-123 ofHenan Sciences Journal Agricultural 基于S蛋白检测猪流行性腹泻抗体 间接ELISA方法的建立 邓祖丽颖 (郑州幼儿师范高等专科学校，河南郑州450000) 扩增PEDV河南流行毒株S基因794bp片段，将其克隆至原核表达载体pET一32a(+)，构建 PAGE分析显示，该蛋白以融合蛋白形式高效表达，分子量约为46．9kD；Western—blot分析表 明，所表达的重组蛋白具有良好的反应原性。以纯化的S蛋白为包被抗原建立检测PED抗体的间 二抗最佳稀释度为1：2000，阳性判定标准为oD45。值≥O．24。应用该方法对采自河南省不同地 区23个养猪场的279份血清样本进行检测，结果显示，母猪血清样本PED抗体阳性率为97．42％ ELISA方法特异性、灵敏性和可重复性良好，可以用于猪群PED抗体水平监测和流行病学调查。 关键词：猪流行性腹泻病毒；S蛋白；原核表达；酶联免疫吸附试验 中图分类号：$858．28文献标志码：A 文章编号：1004—3268(2013)08—0119一05 SProtein ofPEDV and of ProkaryoticExpression Development IndirectELISAforDetectionofIts Antibody DENGZU Li—ying InfantNormal (Zhengzhou 450000，China) School，Zhengzhou Abstract：A ELISAwas todetecttheantibodies spike(S)protein-baseddeveloped againstporcine diarrhea ofS fromPEDVHenanisolatewas virus(PEDV)．The794bp epidemic fragmentgene byRT—PCRandinsertedintothe vector recombinant amplified expressionpET一32a(+)．The wasnamedas fusion was inBI。21thattransfected plasmid pET-32a—S．Aproteinexpressed by andinduced molecularoftherecombinantwasabout pET-32a-S bvIPTG．The weight protein the the 46．9kD bvSDS，andimmunoreactionof recombinantwas analyzed