《5-马来酰亚胺-2-(间马来酰亚胺基苯基)苯并噁唑用于荧光光度法直接测定还原型谷胱甘肽的研究》.pdfVIP

5一马来酰亚胺一2一(问马来酰亚胺基苯基)苯并嗯唑用于 荧光光度法直接测定还原型谷胱甘肽的研究 梁淑彩，王 红，张治民，张华山+ (武汉大学化学系，武汉430072) 摘 要：以5一马来酰亚胺一2一(间马来酰亚胺基苯基)苯并嗯唑(DMPB)为荧光试剂，建 立了在一定量半胱氨酸(Cys)存在下荧光光度法直接测定还原型谷胱甘肽(GSH)的新 方法。研究表明，DMPB荧光很弱，其结构中的两个马来酰亚胺基团都能与GSH或 Cys发生反应，生成具有强荧光的产物。并且DMPB与GSH或Cys的生成物(分别称 7．0 nm红移至A。。／am一310／430nm，最终均在叉。。／am=310／430nm处稳定。在pH min后，生 成的DMPB-GSH的最大荧光波长为A。；／A。。=302／372nm，且最大荧光强度可以稳定 nm，且荧光较弱。利用这一差 1h，而DMPB-Cys的最大荧光波长为A。；／；to。=310／430 别，我们选择在A。。／A。=302／372nm的荧光波长下测定GSH，完成了o．3倍(Cys： 10-7mol·L～，检出限(S／N一3)为1．5×10-9mo卜L～。用该法测定了人全血中的 GSH，结果令人满意。 关键词：5一马来酰亚胺一2一(间马来酰亚胺基苯基)；苯并噫唑；谷胱甘肽；荧光光度法 中图分类号：0657．39；Q516文献标识码：A 还原型谷胱甘肽(GSH)是重要的含巯基三肽化合物，在动物细胞中起着巯基GSH的重要作用逐渐 法、电流分析法、分光光度法、比色法等[5]，但这些方法的选择性不好，灵敏度低。利用荧光光度法或高效 同时存在[5’121。因此，上述试剂在不采用分离的方法而用于荧光光度法直接测定生物样品中的GSH时， 会因Cys的干扰而使结果偏高。 含有双马来酰亚胺基团的化合物，如4，4，-二马来酰亚胺基偶氮苯口3]和1，1，-二马来酰亚胺基二甲 醚[1妇中的两个马来酰亚胺基团均能与巯基化合物发生反应，它们已用于连接蛋白质中的巯基。5一马来酰 5J。 亚胺一2一(问马来酰亚胺基苯基)苯并嗯唑(DMPB)最早是用于合成具有热稳定性的聚亚胺聚合物u DMPB自身荧光很弱，但其结构中的马来酰亚胺基团与巯基反应后可生成强荧光产物。我们在研究它与 巯基化合物的反应时发现，其结构中的两个马来酰亚胺基团也都能与GSH和Cys发生反应，而且它与 收稿日期：2005-07—20通讯联系人：张华山 基金项目：教育部博士点基金(No．048610) 486 万方数据万方数据 第5期 分析科学学报 第21卷 A。。／A。。一302／372nm红移至．=【。。八。。一310／430nm。在pH 下，DMPB与GSH或Cys反应15 nm，最 大荧光强度可以恒定1h，而DMPB-Cys的最大荧光波长为A。。／A。。一310／430nm，荧光强度低。利用这一 10-8～9．6×10q 果满意。 1 实验部分 1．1仪器与试剂 nm和10 RF-5000型荧光分光光度计(日本，岛津)，激发和发射光谱的狭缝分别为5 度计(中山大学)。 DMPB溶液：DMPB按照文献[1钼方法制备，称取0．0192 10_4 0．0157 gCys盐酸盐，用水溶解，定容至i00 倍。GSH溶液的配制：称取0．0317g还原型GSH，