濒危植物华东黄杉遗传多样性分析及其保育.pdf

摘要 摘要 从5个天然居群(江西三清山、安徽休宁、浙江临安、湖南阳明山自然保 护区、阳明山老屋场)采集华东黄杉样本，以改良的CTAB法从华东黄杉叶片 中制备模板DNA，优化了PCR循环参数，建立了ISSR．PCR扩增的最佳反应 体系，筛选出扩增多态性片断较多且扩增产物稳定的引物，通过10条ISSR引 物对89个华东黄杉个体的基因组DNA进行扩增，对华东黄杉居群的遗传多样 性和遗传结构进行了研究。 研究结果表明：CTAB提取液中的体积和提取时间对模板DNA有一定的影 U dNTPs， Taq聚合酶，1．5～2．5mmol／LMgCh，O．2pmol／L引物，0．2mmoFL 延伸5mill，1个循环。 共对100条ISSR引物进行了筛选，分别筛选出扩增条带较多、信号强、背 景清晰的lO条ISSR引物用于5个居群DNA样本扩增，共扩增出76条带，其 中多态性条带数为69个，多态性位点百分比为90．79％，以三清山居群的多态 性位点百分比89．47％，安徽休宁居群的多态性百分比最低为56．58％． 根据不同个体的扩增图构建了0、l矩阵(其中模糊带和弱带忽略不计)输 入计算机。对ISSR数据处理结果如下：POPGENE分析结果表明，华东黄杉具 =o．4974。AMOVA分析表明，在总的遗传变异中有26．88％的变异发生在居群间， 73．12％的变异发生在居群内。由LrPGMA聚类分析得知，5个居群中，湖南阳 明山两支与浙江先聚为一支，再与安徽休宁聚为一支，最后与江西三清山聚合。 鉴于华东黄杉生境环境的特殊性和人为大量的砍伐，华东黄杉的数量逐渐 减少，建议在华东黄杉分布区建立自然保护区，以江西三清山为核心地区，对 其生存空间进行长期、有效的保护。另外，在居群间进行植株和幼苗的相互移 栽，以提高居群间的基因交流，最大限度保护华东黄杉的遗传多样性． 关键词：华东黄杉，ISSR技术。遗传多样性 Ⅱ Abstract The methodCrABwasusedto懿缸actDNAfrom revisory Pseudotsuga which in Flom mountain gausseniiplant-leaveswe佗gath朗xl Jiangxi from$anqing inAnhui province,Xitmingprovince,Lin’缸inZlaejiang natureICS岛YCand mountain mountainintttman oflangmi．gshan Laovoaehang recycling we他ol岖m砌and province．Theparameters in safitableforISSR-PCR WaSestablishedthe a．sscssment amplification p印er．ISSR ollt． of89 earriod sp∞i嚣WaS Theresultsshowthevolumeandtime fo