微生物实验室规范操作.ppt

微生物实验室规范操作 卫生部北京医院 张秀珍 世界卫生组织（WHO）对临床微生物实验室提出三项指导性方针： （1）临床微生物实验室尽可能把目标集中在快速诊断方面； （2）显微镜检查对建立快速的初步诊断具有很大价值； （3）实验室人员必须主动与临床结合，将实验室数据转化为临床有用的信息。 严峻的感染形势 感染性疾病并没有象人类曾经所预料的那样随着抗感染化疗时代的到来而逐一销声匿迹。多种原因造成的易感人群增加; 多重耐药菌如甲氧西林耐药的金葡菌（MRSA）、产ESBL的肺炎克雷伯菌和大肠杆菌、泛耐药的铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌等不断涌现并持续蔓延，原先少见的病原如曲霉菌、念珠菌等深部真菌越来越常见; 新发感染病原如SARS、禽流感、手足口病、甲型H1N1流感等也此起彼伏，感染性疾病仍然是人类关注的热点。 临床微生物实验室在感染诊疗中的地位 改变感染性疾病的预后，关键是疾病的早期诊断和有效的抗感染治疗。临床微生物检验在感染性疾病的诊断和治疗中，具有决定性价值。 感染主要是由病原微生物引起的，微生物正确检验，是建立准确的感染性疾病病原学诊断和针对性的给予抗感染治疗的前提和基础。良好的微生物检验，可以缩短感染确诊的时间，同时可以使抗感染治疗准确率提高，从而达到降低医疗费用、改善疾病预后。 而错误的微生物检验，将导致错误的病原学诊断和错误的临床用药决策。 临床微生物检验的主要任务 ⑴对微生物标本做出快速、准确的鉴定报告，及时满足临床的需要； ⑵进行有关抗菌药物耐药性方面的各种试验，受理抗菌药物合理应用的咨询； ⑶密切结合临床，与临床医师讨论、研究及处理有关感染性疾病的问题； ⑷参与抗菌药物临床合理应用的管理和医院感染监测、控制和管理。 卫生部 国家中医药管理局 总后卫生部发布卫医发 2004 285 号文件 关于实施《抗菌药物临床应用指导原则》的通知 2009-01-9-11卫生部关于合理应用抗菌药物的星火计划启动 三年180个省市8个专业组,包括微生物实验室,药房,呼吸,血液,儿科,ICU,感染科,30000-45000个医生或实验室接受培训. 萌芽计划:2009年6月启动 3年培训450名二级甲等医院微生物实验室技术人员 目的 规范常规微生物检验技术 提高基层医院微生物检验人员的业务水平 更新老的实验诊断理念和方法 微生物实验室应适应临床需要 正确 规范操作 快速 建立新的理念及时报告 有效 与临床沟通把实验室数据变为有用的信息 1.标本采集和运输棉 花 纤 维 + 竹 / 木 条 抑 菌 区 是 因 为 ： 植 物 分 泌 出 来 的 ： 脂 肪 酸 ； 树 脂 ； 福 尔 马 林 氯 气 ， 重 金 属 与 胶 水 的 影 响 美 国 与 欧 洲 对 实 验 室 的 新 要 求 2.血液及骨髓标本的收集美国和英国血液培养指南 1.??? 采血时间：尽可能在用抗生素前，心内膜炎和导管相关性感染例外。 2.??? 采血量：采一次或采一瓶是错误的，应采２－３套，至少应采一套 2瓶，分需氧和厌氧。2瓶血量不少于16-20ml，先将10ml注入需氧瓶，再将剩余血采血注入厌氧瓶。 3.??? 采血方法：不要与血气和血沉标本一起采血；不推荐血入瓶前换针头；不推荐静脉血直接入瓶；不宜在静脉导管或静脉留置口采血。 血液及骨髓标本 4.?? 采血间隔：如第一次采集2套（4瓶）血培养标本，在以后的2-5天不必采血，但除外心内膜炎和导管相关性败血症。 5.? 儿童：采血量是总血量的1%。，不做厌氧培养． 6.?? 延迟培养瓶处理: 延迟培养瓶不要放冰箱或孵箱,放常温，尽早送往临床细菌室。 7.??? 皮肤消毒液推荐：建议先用70-80%异丙醇去脂，再用葡萄糖酸氯乙定消毒。 第一次多瓶血液培养的意义 提高阳性率 识别定植菌或致病菌 多瓶采样后的以后的2-5天不需采样,可提前获得病原学报告 为什么必须同时做厌氧细菌? 16%链球菌 17%肠杆菌科细菌 仅厌氧瓶报告阳性 Bartlett JG,et al. The controversy regarding routine anaerobic blood cultures. Am J Med , 2000，108:505-506. 抽血量和体重的关系 3. 趋向性鉴定试验 革兰阳性球菌: 触酶试验:3%H2O2用30%的H2O2稀释10倍后使用，避光4度保存 ；试验时设立阳性和阴性对照；1分钟内产生大量气泡为阳性。 凝固酶试验：采用商品试剂或EDTA抗凝的多个兔混合血浆；测定玻片法测定凝聚因子10秒钟即可观察结果；测定凝固酶需在37度3-4h，若阴性还应放置24h再观察结果。 革兰阴性杆菌趋