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宝山壁画 宝山壁画是引人注目的昂贵文物。此壁画发现于阿鲁科尔沁旗东沙布乡境内。1994年列为“全国十大考古新发现”之一。宝山壁画中最引人注目的是《杨贵妃教鹦鹉图》。该画高0.7米、宽2.3米，用于笔重彩绘制，最突出的表现了 晚唐风格。唐代擅长绘贵妇仕女的大师周昉绘制了《杨贵妃教鹦鹉图》，不仅享誉中原，而且还影响全国各地。发现于阿旗宝山古墓里的这幅画，就是契丹人聘请中原画家按照周氏风格绘制的， 技法深得周氏画风的真传。在唐人真迹稀如星风的今天，能够从中完整了解唐代人物画的杰出成就，堪称美术史研究的辛事。这幅壁画现今保存在阿鲁科尔沁旗博物馆，历经千年，恍如新绘，是该馆的镇馆之宝。 欢迎大家观看！ * 设置不转染同时加药的阴性对照，如果加药后阴性对照全部死亡，并且2-3天后撤去药物正常继续培养时没有重新长起来，则才能说筛出来的细胞是阳性转染成功的。 * 933年的约翰·格登任职于英国剑桥格登研究所。他于1962年通过实验把蝌蚪的分化细胞的细胞核移植进入卵母细胞质中，并培育出成体青蛙。这一实验首次证实分化了的细胞基因组是可以逆转变化的，具有划时代的意义。 * 脊髓性肌萎缩SMA 活运动神经元SMN1 病人会肌肉萎缩，瘫痪，幼年死亡 * * ` 打靶示意图（定点缺失） 打靶效率经验参考 建立knock-out细胞系（双拷贝敲除）： 293T，hela细胞：建系成功率100%，目前成功建系19个，打靶效率约为30 % -70%，最短耗时2个月 ES/iPS细胞：建系成功率100%，目前成功建系7个，打靶效率约为20 % -50%，最短耗时4个月 数据统计至2013.07月 打靶效率经验参考 建立knock-in细胞系（单拷贝敲入） ： 293T、hela细胞等：建系成功率100%，目前已成功建系6个，打靶效率约为20 % -55%，最短耗时3个月 ES/iPS细胞：建系成功率100%，目前已成功建系2个，最短耗时5.5个月，打靶效率约为10 % -28% 数据统计至2013.07月 成功实例2 动物模型—斑马鱼 Zebra fish-gene A WT TALEN 580bp Zebrafish-geneA (Kpn I) WT TALEN 580bp 401bp 179bp Genomic PCR Restrictive enzyme digest 斑马鱼内XX基因敲除 结果回馈 我方设计TALEN识别序列； 提供最终的TALEN质粒 TALEN质粒线性化； 体外转录 显微注射一细胞期受精卵 48h后收集，抽提胚胎 基因组DNA PCR扩增，酶切看结果 打靶效率为80%以上 应用实例3 动物模型——小鼠 1. 设计构建TALEN打靶载 2. 细胞水平TALEN 活性检测 3. 体外转录生成mRNA 4. 往受精卵注射mRNA 5. 得到嵌合体小鼠（F0） 6. 得到F1 heterozygote 7. 得到F2 homozygote 1. 设计构建TALEN及KI donor载体 2. 细胞水平TALEN活性检测 基因敲除小鼠 基因敲入小鼠 3. 体外转录生成mRNA 4. 往受精卵注射mRNA/DNA 混合物 3. 建立ES基因敲入细胞系 4. 将ES细胞系注射至囊胚 5. 得到嵌合体小鼠（F0） 6. 得到F1 heterozygote 7. 得到F2 homozygote 应用实例3 动物模型——小鼠 PNAS. 2013 Mar; 110(10):3782-7 应用 I: 基因敲除 TALEN 的实际应用 Nat Biotechnol 2013 Jan; 31(1):23-4 Phenotypic analysis of gene-specific knockout mice has transformed our understanding of in vivo gene functions. Generation of knockout mice, however, remains a time-consuming and expensive process. Transcription activator-like (TAL) effector nucleases (TALENs) are highly effective in inducing mutations at specific genomic loci, and consequently TALEN-mediated mutagenesis in zygotesis a potential alternative to conventional gene tar