酵母杂交技术原理与应用.ppt

酵母双杂交系统的建立 酵母双杂交系统的建立得力于对真核生物调控转录起始过程的认识。 细胞起始基因转录需要有反式转录激活因子的参与。 80年代的工作表明， 转录激活因子在结构上是组件式的， 即这些因子往往由两个或两个以上相互独立的结构域构成， 其中有DNA结合结构域(DNA binding domain， 简称为BD)和转录激活结构域(activation domain， 简称为AD)，　 BD可识别DNA上的特异序列，并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游 ；AD可同转录复合体的其他成分作用，启动它所调节的基因的转录。单独的BD虽然能和启动子结合， 但是不能激活转录。 不同转录激活因子的BD和AD形成的杂合蛋白仍然具有正常的激活转录的功能 （如酵母细胞的Gal4蛋白的BD与大肠杆菌的一个酸性激活结构域B42　融合得到的杂合蛋白仍然可结合到Gal4结合位点并激活转录） 　　酵母双杂交系统的另一个重要的元件是报道株。报道株指经改造的、含报道基因(reporter gene)的重组质粒的宿主细胞。 　　 最常用的是酵母细胞， 酵母细胞作为报道株　具有许多优点: 　　　〈1〉 易于转化、便于回收扩增质粒。 　　　〈2〉具有可直接进行选择的标记基因和特征性报道基因。 　　　〈3〉酵母的内源性蛋白不易同来源于哺