丙种球蛋白的制备黄晨.ppt

丙种球蛋白的电泳制备 姓名：黄晨 班级：生物制药1311 学号：2013040836 指导老师：彭加平 韦平和 丙种球蛋白概念 中文简称：“丙球” 　英文名称：γ-globulin、gamma globulin 别名： 免疫血清球蛋白，普通免疫球蛋白，人血丙种球蛋白，丙种球蛋白，静脉注射用人免疫球蛋白（pH4） 丙种球蛋白预防传染性肝炎，预防麻疹等病毒性疾病感染，治疗先天性丙种球蛋白缺乏症 ，与抗生素合并使用，可提高对某些严重细菌性和病毒性疾病感染的疗效。 注：由于人血中的免疫球蛋白大多数为丙种球蛋白（γ-球蛋白），有时丙种球蛋白也被混称为“免疫球蛋白” 。 药理作用 注射丙种球蛋白是一种被动免疫疗法。它是把免疫球蛋白内含有的大量抗体输给受者，使之从低或无免疫状态很快达到暂时免疫保护状态。由于抗体与抗原相互作用起到直接中和毒素与杀死细菌和病毒。因此免疫球蛋白制品对预防细菌、病毒性感染有一定的作用。 适应症 丙种球蛋白是血液中一种蛋白质，它通常来源于许多人献的血液，常被用来防止和治疗感染，对慢性疲劳症有显著的改善作用。适用于预防传染性肝炎，麻疹等病毒性疾病感染,，治疗先生性丙种球蛋白缺乏症，可提高对某些严重细菌性和病毒性疾病感染的疗效。 制备丙种球蛋白的方法 1、电泳法（聚丙烯酰胺凝胶电泳） 定义：利用溶液中带有不同量的电荷的阳离子或阴离子，在外加电场中以不同的迁移速度向电极移动，而达到分离目的的分析方法 2、层析法 定义:是一种利用混合物中诸组分在两相间的分配原理以获得分离的方法。 电泳 作用：用于分离蛋白质和寡核苷酸。 原理 聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS）；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。 聚丙烯酰胺凝胶有下列特性 凝胶透明，有弹性，机械性能好； 化学性能稳定，与被分离物不起化学反应； 对pH和温度变化较稳定,几乎无吸附和电渗作用； 样品用量少，灵敏度可达10-6g; 凝胶孔径可调节； 分辨率高。 盘状电泳 圆盘电泳是带电粒子(胶体颗粒、离子等)在电场的作用下在特定的介质中向与其电荷性质相反的电极方向定向泳动的现象.广泛应用于生物大分子的分离和鉴定。 它是利用丙烯酰胺和双丙烯酰胺在催化剂的作用下聚合成大分子的凝胶物。它同时兼有分子筛和电泳效应。当样品通过凝胶进行电泳时，便可以根据其样品中各分子的电荷和分子量的不同而泳动出不同的区带。由于聚丙烯酰胺凝胶化学性质较琼脂稳定，很少带有侧基，在电泳过程中，吸附作用与电渗作用均小，所以该技术的分辨率均高于其它琼脂电泳技术。 聚丙烯酰胺凝胶电泳的三种效应 1、 浓缩效应 每种蛋白质分子所载有效电荷不同，因而迁移率不同。 有效电荷多的，泳动的快，反之则慢。 2、电荷效应 分子量大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径的分离胶时，受凝胶阻滞的程度不同，表现出不同的迁移率。 3、分子筛效应 样品在分离之前，首先在浓缩胶得到浓缩，变成狭窄（很薄）的样品带，使分辨率大大提高。 实验方法 材料与试剂 1．20％单体母液丙烯酰胺（Aorylamide） 19.60g 双丙烯酰胺（N，N—methylene Bisaerylamide） 0.40g H2O 加至 100.00ml 2．pH8.0 Tris—EDTA缓冲液Tris（三羟基甲基氨基甲烷） 6.05g EDTA（乙二胺四乙酸） 1.17g H2O 加至 100.00ml 3．B—三甲基胺基丙腈液（B—DMPN） （Dimethylaminopropionitrile），原液于4℃冰箱保存 4．10％过硫酸铵溶液 过硫酸铵0.50g H2O 加至 5.00ml 现用现配或配后低温保存不超过一周。 5．0.025Mol/L pH9.0 硼酸缓冲液 硼酸3.948g 硼砂 30.512g H2O 加至 1000.0ml 使用时取该液90ml加H2O至1 440ml，即为电泳液。 操作步骤 1、分离胶的制备： （1）、将清洁、无破碎干燥的小玻管一端，用胶布贴封后，朝下垂直放入有机玻璃凝胶玻管架的孔中，并在小玻管的7.0 cm处作一记号。 （2）用自动取液器吸取上述配好的分离凝胶贮液沿着小玻管内壁小心准确加入7.0 cm高。 （3）凝胶溶液加毕后，随即吸取蒸馏水，加至管中的凝胶表面，使其表面覆盖一水层（水封，1.0cm 高）。在灌胶和封水的过程中，操作要轻，以避免产生气泡。 （4）将加注好