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九血清胆固醇测定(磷硫铁法).ppt

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九血清胆固醇测定(磷硫铁法).ppt

实验九 血清胆固醇的定量测定 ----磷硫铁法 ?? 一、实验目的 1.学习胆固醇测定的一种方法 2.学会制备无蛋白血清液 二、实验原理 (一) 胆固醇cholesterol 是一种环戊烷多氢菲的衍生物。早在18世纪人们已从胆石中发现了胆固醇,它广泛存在于动物体内,尤以脑及神经组织中最为丰富,在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也高。其溶解性与脂肪类似,不溶于水,易溶于乙醚、氯仿等溶剂。 是合成胆汁酸,维生素D以及甾体激素的原料 胆固醇是动物组织细胞所不可缺少的重要物质,它不仅参与形成细胞膜。 正常人体内血液总胆固醇110~220毫克/100毫升。 血液中胆固醇含量过高,表示胆固醇代谢可能发生障碍。冠状动脉粥样硬化患者的血清胆固醇含量往往偏高。因此临床化验上测定血清胆固醇含量将有助于诊断某些疾病。 人体胆固醇来自食物及体内合成两个途径。 1. 2/3由肝脏制造出 2.其余的1/3来自食物,尤以肥肉﹑内脏、蛋黄含量较高。 机体的胆固醇以两种形式存在: 游离的胆固醇 胆固醇酯 胆固醇必须和脂蛋白结合才能运送到体内各部分;脂蛋白又分低密度脂蛋白LDL和高密度脂蛋白HDL。 (二)血液 组成:血细胞(有形体) 血浆(包含血清及纤维蛋白原) 血浆是血液的重要组成分,呈淡黄色液体,水分占90~92%,溶质以血浆蛋白为主 。 血浆总胆固醇的1/3以游离形式存在,2/3为与脂肪酸结合之胆固醇酯。 (三)实验反应原理 血清经无水乙醇提取,蛋白质被沉淀,胆固醇及其酯溶在无水乙醇中。在磷硫铁试剂作用下,胆固醇及其酯与试剂产生紫红色物质,呈色程度与胆固醇及其酯含量成正比。此物质在560 nm波长处有最大吸收。可用比色法作定量测定。 三、实验器材及试剂 血清 722型分光光度计 离心机、离心管、试管、吸管 10%三氯化铁溶液、磷硫铁试剂、胆固醇标准液、无水乙醇 1.胆固醇的提取。 吸取0.1ml血清置于干燥离心管内,先加0.4ml无水乙醇,摇匀后再加2ml无水乙醇,摇匀,10分钟后离心,取上清备用。 2.比色测定 干燥试管3支,分别加入1ml无水乙醇(空白管)、1ml胆固醇标准液(标准管)、1ml样品提取液(样品管),各管各加入1ml磷硫铁试剂,摇匀,10分钟后560nm处比色。 四、实验步骤 A1C0 M=----------------*100 0.04A0 M:100ml血清中胆固醇的质量(mg) A1:样品液的吸光度 A0:标准液的吸光度 C0:标准液中胆固醇的浓度(0.08mg/ml) 100ml血清中胆固醇110~220mg 五、计算 五、思考题 1、酯类难溶于水,将它们均匀分散在水中则形成乳浊液。为什么正常人血浆和血清中含有酯类虽多,但却清澈透明? 2、提取胆固醇时乙醇为什么分两次加入? * *

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