不同浓度的葡萄糖和胰岛素对Colon26肿瘤细胞分泌免疫抑制物质的影响及分子机制研究.pdf

中文摘要 不同浓度的葡萄糖和胰岛素对Colon26肿瘤细胞分泌 免疫抑制物质的影响及其分子机制的研究 摘 要 目的：肿瘤和糖尿病已成为当今严重危害人类健康和生命的重大疾 病，它们的发病率和死亡率逐年升高。近年来，越来越多的临床和流行病 学资料显示，糖尿病人易患结直肠癌。糖尿病患者与非糖尿病患者比较， 患结直肠癌的风险明显增加，已有人提出糖尿病是结直肠癌患病的独立危 险因素。糖尿病患者结直肠癌的发病率明显高于非糖尿病患者，糖尿病人 群中结直肠癌的复发率和死亡率亦明显增加。糖尿病与结直肠癌的关系已 经成为备受人们关注的热点；研究和揭示两者之间的病理生理关系及其分 子机制，已成为该领域中迫切需要进行探索的重要课题。 肿瘤免疫学的研究已经揭示，肿瘤的发生、发展，不仅与机体的免疫 功能密切相关，在某种意义上更与肿瘤细胞的免疫抑制作用密切相关。肿 瘤细胞分泌免疫抑制物质抑制机体免疫功能，即肿瘤细胞的免疫抑制作 用，是肿瘤细胞逃避机体免疫监视，使肿瘤得以发生和发展的重要机制， 在促进机体肿瘤的发生、发展中具有极其重要的作用。肿瘤细胞通过其分 泌的免疫抑制物质，不但有可能在远离肿瘤部位的机体其他部位发挥免疫 抑制作用，更可在肿瘤局部形成深度免疫抑制区，即所谓“黑洞”区，以至 于不仅使原本就在此区之中的原位免疫细胞功能严重受抑，而且还能使由 此区之外进入其中的功能正常甚至已经活化的免疫细胞成为功能受抑的 “沉默”细胞，从而使之失去有效清除肿瘤细胞的能力，显然这是在即使免 疫功能完全正常的机体中肿瘤也能逃避机体免疫监视而得以发生和发展 的重要机制。 糖尿病重要的病理生理特征之一，就是患者血中葡萄糖和胰岛素水平 的异常改变。现代医学也正是依据患者血中葡萄糖和胰岛素水平的异常改 变，将糖尿病的自然病程分为四个阶段。糖尿病自然病程不同阶段血中的 葡萄糖和胰岛素，各有与其所处病程阶段相应的不同浓度。糖尿病患者易 患结直肠癌，是否与其自然病程不同阶段血中不同浓度的葡萄糖和胰岛素 能影响结直肠癌肿瘤细胞分泌免疫抑制物质有关，目前国内外尚未见报 中文摘要 道，十分需要对之进行研究和探讨。迄今，已见于报道能由肿瘤细胞分泌 抑制作用较强，并且也恰是可由结直肠癌肿瘤细胞株Colon26肿瘤细胞分 泌的三种重要的免疫抑制物质。因此，本研究选用小鼠结直肠癌肿瘤细胞 株Colon26肿瘤细胞作为研究对象，以模拟糖尿病自然病程血中不同浓度 的葡萄糖和胰岛素对之进行作用，测定是否对Colon26肿瘤细胞分泌这三 种免疫抑制物质有影响和有何影响，并初步探索是通过何种分子机制导致 了这种影响。从影响结直肠癌肿瘤细胞分泌免疫抑制物质的角度，为研究 糖尿病与结直肠癌之间的病理生理关系，揭示糖尿病患者为何易患结直肠 癌，提供新的研究思路和实验依据。 全培养基，CM)中外加葡萄糖和胰岛素的终浓度不同，分为12个组： 结束后，分别收集细胞培养上清和细胞。ELISA法分别检测细胞培养上 增产物行琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像系统上扫描分析，分别计算VEGF、 mRNA相对表达量，表达强度以相对表达系数RG表示。 TGF．131和IL．6 全部实验重复三次，结果数据以三次重复实验的；士s表示。统计学分析采 用t检验和单因素方差分析，以P0．05为有统计学差异。 结果： 中文摘要 1不同浓度的葡萄糖对Colon26肿瘤细胞VEGF分泌的影响 的葡萄糖，对Colon26肿瘤细胞分泌VEGF均无影响。 2不同浓度的胰岛素对Colon26肿瘤细胞VEGF分泌的影响 浓度(分别为9．5583土0．2691，9．5833+0．0764和9．61674-0．1258)，差异均 加Colon26肿瘤细胞VEGF的分泌。 相比较均无显著性差异(均为P0．05)。显示，不同浓度的葡萄糖和胰岛素 应。 组和L(hGhI)组：它们的VEGF mRNA扩增产物的电泳条带，与A (Contr01)组相比明显增粗变亮；它们的VEGFmRNA的表达(分别为 0．8802+0．1900、0．8605+0．1 相比均有显著性差异(均为P0．01)。而其他组与A组相比