盾叶薯蓣三倍体细胞悬浮培养及其植株再生.pdfVIP

摘要 盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensisC．H．Wright)为薯蓣科薯蓣属多年生缠绕草质 藤本植物，别名黄姜，火头根。其根茎中富含的薯蓣皂苷元是合成甾体类激素和避孕药 的主要原料，因人工难以合成，被人们称为“药用黄金”。本研究室利用组织培养技术， 诱导胚乳培养获得了盾叶薯蓣三倍体试管苗，在此基础上，本文研究了盾叶薯蓣三倍体 细胞悬浮培养及其植株再生过程，以期建立细胞悬浮培养与高频率植株再生技术体系， 为利用盾叶薯蓣细胞大规模培养生产薯蓣皂苷元奠定技术基础。本实验的结果如下： 1．愈伤组织的诱导与继代。三倍体盾叶薯蓣茎段愈伤组织诱导的适宜培养基是MS 1．5 1．0 +2，4-D mg·L1+6-BAmg·L1，其诱导率达80．56％。经3～5代后，根据其颜色特 征和质地，可分为I、II、III、IV四种类型。 2．三倍体细胞悬浮培养体系的建立及其生理生化特性的研究。选择颜色质地较好 的I型愈伤组织建立细胞悬浮培养体系，细胞生长曲线呈“S”型，分为延迟期(0~3d)， 对数期(3～12d)，静止期(12—15d)。细胞活力，可溶性蛋白质含量，均呈现先升高后 降低的趋势，并且均在第6天达到最大值；细胞培养液的pH值先下降后趋于平缓，维 持在4．8～7．0之间；培养液的电导率在12天时降至最低点，进入静期后，培养液的相对 电导率开始回升，后渐趋于平缓；培养初期，培养基中磷酸盐、硝酸盐、铵盐浓度分别 为118．75 mg·L-1、2．44x103mg·L1、3．71x102mg·L～，培养结束时，培养液中分别有9．26 ％、20．47％、6．13％的磷酸盐、硝酸盐、铵盐剩余；延迟期，细胞培养物中皂菅元合成 速度较慢，3天后皂苷元迅速合成，9天时皂苷元含量达到最大，为O．58％，之后皂苷 元含量下降，进入静止期后，皂苷元含量维持在0．41％左右。 3．三倍体细胞悬浮培养体系的优化。盾叶薯蓣三倍体细胞悬浮培养保持良好的生 1．0 长状态和皂苷元合成能力的适宜条件是：以3／4MS+NAA 0．2 mg·L-1+6-BA mg·L1 为培养基，4．5 g-L’1(DW)的接种量，12天的继代周期，30g．L。1蔗糖作为碳源，pH值 调至6．0左右。此外，研究了酵母、cu+诱导子及前提物质乙酸钠对细胞悬浮培养体系 的影响。当酵母诱导子浓度为2．5％(v／v)时，细胞干重及皂苷元含量最高，分别为18．77 g·L-1和0．81％；当乙酸钠浓度为0．5mg·L以时，细胞的干重和皂苷元含量最大，分别为 15．00 g·L．1和0．79％。相对于对照，添加不同浓度的Cu2+对盾叶薯蓣三倍体细胞的生长 及皂苷元没有促进作用。 2．0 4．三倍体悬浮培养细胞的植株再生。适宜的分化培养基为MS+6-BA mg·L-1+ NAA 0．4 grll的带芽茎段接种到生根培养基中， mg·L．1，培养180天可获得再生苗。将2~3 30天待根数增多且粗壮后进行驯化移栽，移栽茁成活率达8004。 关键词：盾叶薯蓣，三倍体，愈伤组织，细胞悬浮培养，植株再生 II ABSTRACT Dioscoma root．Itsrootsrichinthe z自唱西删缸C．H．Wright．known懿yellowginger,rotor