PCR及SSCPPAGE技术.pptVIP

电泳完毕后，撬开玻璃板，将粘有凝胶的玻璃板置于塑料盘（不要碰凝胶表面！） 用蒸馏水漂洗两次，并取出玻璃板 去水后，用10%乙醇进行凝胶固定 10 min，轻摇 去乙醇，水洗、加入1%硝酸，轻摇5min 吸出硝酸，用蒸馏水漂洗2次 实验操作及注意事项 （下列加液量以刚好覆盖凝胶为宜） 加入0.2%硝酸银溶液，轻摇20min 蒸馏水漂洗3次 去水后，加入显色液，在非直射光线下观察显色 观察区带出现，效果最佳时移除显色液 加入3%乙酸，轻摇5min 移除3%的乙酸溶液，10%乙醇洗涤1次 观察结果? 结果分析与问题讨论 SSCP影响因素 1．用于分析的核酸片段越小，敏感性越高，一 般 150-300bp 2．游离的引物可与PCR产物结合影响其泳动 3. 保持胶内温度恒定可保证SSCP结果的稳定 4. 凝胶的长度: 一般凝胶板长度在40cm以上 6. 关于对照的设置。判断突变时一定要有阳性对照。假 阴性结果是SSCP的主要缺点 7. 结果分析：结果至少显示3条带，甚至可以出现更多条 带（一种DNA单链有时可形成两种或多种构象） 。 利用物质的两个差异来分离物质 电荷差异 电荷性质 电荷数量