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第十一章 发酵过程的实验室研究、中试和放大 ①实验室规模，进行菌种的筛选和培养基的研究； ②中试工厂规模，确定菌种培养的最佳操作条件； ③工厂生产规模，进行大规模生产，取得经济效益的过程。 实验室规模 中试规模 工厂生产规模 一、实验设备 1．摇瓶机：为气体自然交换的摇瓶发酵设备，包括不同类型的摇床和摇瓶。 往复式（80-120次／min ，冲程8-l2cm，适于培养细菌和酵母）和旋转式（80-300r／min，偏心距为3-6cm） 可装有不同数量和不同大小的摇瓶 近代趋向于采用 500r／min高转速的旋转式摇瓶机 摇瓶机应放在有加温和冷却设备的控温室中。 2．发酵罐：为强制通气的发酵设备，有容量大小不同的发酵罐。 玻璃或不锈钢制作 附有温度、pH、溶氧、氧化还原电位、泡沫和液位等参数的传感器，有的还配有电子计算机，用于监测和自动控制发酵过程。 一般1L 发酵罐用于制备种子和适应性试验；4-28L发酵罐适用于基础考查实验， 30-150L或更大的发酵罐适用于中间放大试验等。 二、摇瓶试验 1．瓶塞对氧传递的阻力 2．水蒸发的影响 摇瓶在振荡期间，水分经由瓶塞而蒸发。 水分蒸发的影响：既影响培养液的体积与摇瓶体积的比值，继而改变氧传递速率，又改变菌体产物的浓度。 水蒸发量与发酵温度、周围空气的相对湿度和水汽的传递系数等因素有关。 3．比表面积的影响 摇瓶发酵所需的氧是由表面通气供给的。它的氧传递速率（比表面积）的大小是由： ① 摇瓶机振荡的频率和振幅大小； ② 摇瓶内培养基体积与摇瓶总体积的比率； ③ 摇瓶的形式。 等三方面因素所决定的。 3．比表面积 的影响 1．微生物发酵的实验室研究的目的 ① 研究菌种的保藏：生产菌株在各种保存条件下的稳定性必须经过长时间的考查，才能确定最好的保存方法。同时也要有足够的保存菌株供长时期内的试验使用。 ② 研究菌株在固体培养基上培养和繁殖条件：菌株繁殖培养基一定要达到菌落生长良好、孢子丰满和菌株稳定三个要求。 ③ 考查培养基最适组成：在研究开始阶段，就要确定培养基的组成。所用原材料的品质和用量，以及培养基的制备技术(如灭菌方式等)都要进行优化。 ④ 实验室规模的培养技术：菌株和培养条件(培养基组成、培养温度和培养时间等)是紧密相连的整个系统，故要全面考查。培养基确定后，还要细心考查其它因素。 2．研究实验的统计学方法 正交设计是根据正交性来挑选代表点的，它在挑选代表点时有两个特点：均匀分散，整齐可比。“均匀分散”使试验点均衡地布在试验范围内，让每个试验点有充分的代表性,“整齐可比” 使试验结果的分析十分方便，易于估计各因素的主效应和部分交互效应，从而可分析各因素对指标的影响大小和变化规律。但是，为了照顾“整齐可比”,它的试验点并没有能做到充分 “均匀分散”；为了达到“整齐可比”，试验点的数目就必须比较多。 2．研究实验的统计学方法 均匀设计只考虑试验点在试验范围内充分“均匀散布”而不考虑“整齐可比”，因此它的试验布点的均匀性会比正交设计试验点的均匀性更好，使试验点具有更好的代表性。由于这种方法不再考虑正交设计中为“整齐可比”而设置的实验点，因而大大减少了试验次数，这是它与正交试验设计法的最大不同之处。它由方开泰教授和数学家王元在1978年共同提出。 “均匀设计”法是一种将试验点均匀地散布在试验范围内的科学试验方法，尤其是对那些试验范围较大、因素的水平数较多的复杂试验，这一方法会发挥出其独特的威力。数学家创造“均匀设计”法的起因，来源于高科技难题。 “均匀设计”法是1978年由王元和方开泰提出，目的是解决导弹弹道系统的指挥仪设计。 70年代未，我国航天三院及协作单位的科技人员在研讨某项尖端工程的数学模型时，曾试用国外方法，长时间得不到理想结果。对于他们提出5因素31水平试验，可能的试验有2800多万次之多，而要求的试验总次数则限定在50次以内，对这个难题，已有正交设计表无法满足要求。航天科技人员求助于中科院数学所，多年从事数理统计颇有成效的方开泰在苦思中想到了《数论在近似分析中的应用》一书的作者华罗庚和王元，并主动与王元商议把数论方法应用于试验设计。他们经过三个多月的深入探索，一位数理统计专家和一位数论专家合作共同创造出“均匀设计”法这个全新的试验设计方法。依此方法，5因素31个水平的试验，仅做31次试验，其效果便接近于2800多万次的试验，成功地解决了难题。 一、摇瓶和罐培养的差异 1．体积氧传递系数(KLa)和溶解氧的差异 摇瓶＜罐（罐中的Kd一般都大于摇瓶） 亚硫酸氧化值(Kd)：以大气压作推动力，采用亚硫酸盐氧化法测定的溶氧系数。表示氧溶入培养液速率的大小。 2．CO2浓度的差异 摇瓶＜罐 CO2在水中的溶解度随外界压力的增大而增加。发酵