S-211枯草芽孢杆菌固态发酵羊胃容物产木聚糖酶地研究.pdfVIP

摘 要 以产胞外木聚糖酶的实验室保藏菌种枯草芽孢杆菌S-211 为研究对象，分别从 培养基组分、无机盐离子、接种量、发酵时间、发酵温度及初始pH 等单因素出发， 研究了这些因素对枯草芽孢杆菌 S-211 固态发酵羊胃容物产木聚糖酶的影响，并对 影响因素进行了正交优化。其研究结果表明：适宜于枯草芽孢杆菌 S-211 固态发酵 的最佳培养基配方为：(在100mL 三角瓶中加入10g 培养基)羊胃容物：玉米粉：豆 2+ + 2+ + 2+ 饼粉：麸皮=50：12：19：19、Mn 0.6g/L、Na 7g/L、Mg 5g/L、K 14g/L 、Fe 0.3g/L、 Ca2+6g/L 、Zn2+ 0.5g/L 。发酵培养基配方确定后，通过对初始pH 值、接种量、发酵 温度、发酵时间等发酵条件的摸索，确定最佳发酵工艺条件为：初始pH 7.0、接种 7 量4mL （即在每100mL 三角瓶中接入4mL 浓度为10 cfu/mL 的孢子悬液）、发酵温 度30℃、发酵时间36h，经优化后的枯草芽孢杆菌S-211 固态发酵50%羊胃容物产 木聚糖酶酶活达到了 1219.63U/mL，较原始基础发酵培养基在常规培养条件下的酶 活676.21U/mL 提高了1.8 倍，为放大枯草芽孢杆菌S-211 固态发酵羊胃容物产木聚 糖酶的发酵工艺条件提供了可靠的理论依据。 按优化后的条件对枯草芽孢杆菌 S-211 进行产酶培养，得到粗酶液。发酵液经 20%-80%硫酸铵分级沉淀、透析袋浓缩、Sephadex-G25 脱盐、Sephadex-G100 凝胶 层析分离纯化后，得到一个电泳纯的木聚糖酶，酶纯化倍数为 5.28 ，回收率为 30.98% ，比活达 14.58IU/mg。该酶经 SDS显示为单一电泳带，分子量为 37.8KDa 。 对枯草芽孢杆菌 S-211 木聚糖酶进行酶学性质测定，结果表明该酶最适反应温 度为55℃，在25 ℃-50℃具有较好的稳定性；最适反应pH 值为pH6.0 ，在pH4.0-pH8.6 2+ 3+ 2+ 2+ 2+ 2+ + 具有较好的稳定性；Pb 、Fe 、Hg 对酶有抑制作用，Mg 、Zn 、Fe 、K 对酶有 一定的激活作用；在 55℃，pH6.0 条件下，该酶对木聚糖的米氏常数 Km 为 5.202mg∕mL，最大反应速度Vmax 为0.243mg/(min·mL) 。 关键词：枯草芽孢杆菌；固态发酵；羊胃容物；木聚糖酶；正交优化；分离纯化 Solid-state Fermentation of Sheep Gastric Contents to Produce Xylanase by Bacillus Subtilis S-211 Abstract The paper studied respectively from the medium components,inorganic salts, inoculum,cultivation time,cultivation temperature and initial pH on the single factor solid-state fermentation of laboratory preservation Bacillus subtilis S-211 producing exocellular xylanase by sheep gastric contents and optimized by orthogonal experimental design.The result