肝癌细胞在不同受体趋化剂中的趋化行为及和整合素与细胞骨架的关系.pdfVIP

重庆大学硕士论文 中文摘要 摘 要 趋化最初是单细胞生物某些细胞最基本最原始的运动形式，像变形虫，溶组 织阿米巴等靠体表任何部位形成的临时性的细胞质突起（伪足）作为运动器而运 动。很多资料认为：伪足的形成是由于骨架再组装驱动，特别是肌动蛋白微丝骨 架的重组。伪足作为一个突出的小泡出现在显微镜下，有时沿着下层基质变的扁 平（像扁平足），有时更圆或离开表面（像头足）。从荧光显微镜或电子显微镜发 现：这个区域总是包含有密集的F-actin 微丝网络和少量的微管。尽管actin 微丝 在伪足形成时所起的作用或多或少的已被接受，人们对于产生推力的机理仍旧有 不同的意见。涉及到推力的模型从肌动蛋白在膜上直接起作用，到肌浆球蛋白的 收缩，或可利用的凝胶渗透压驱使F-actin 微丝网络凝胶化等等均被提出来说明伪 足的扩展。 本文应用生物力学、细胞生物学、光镜和电镜技术以肝实质癌细胞 （hepatocellular carcinoma cells ，HCC ）为研究对象，用不同受体的趋化剂作用于 肝癌细胞SMMC-7721 株，通过微吸管吸吮技术和Boyden 小室来研究其趋化特性， 观察肝癌细胞在趋化剂IV 型胶原、层粘连蛋白、组织胺作用下对细胞伪足相互作 用的影响。本研究方法具有直观、精细，易定量的特点；深入研究癌细胞趋化行 为和分子机制，进而防治侵袭和转移，具有现实意义。 本课题的主要研究内容及结果如下： （1） 用单微吸管法研究肝癌细胞在IV 型胶原（type IV collagen ，Col IV ）、 层粘连蛋白（laminin ，LN ）、组织胺（Histamine ）趋化作用下伪足生长的动态过 程，同时考察了肝癌细胞伪足的形成分别对趋化液中ColIV、LN 和组织胺浓度的 依赖性。随着ColIV 趋化剂浓度的增加（100 µg/ml~400 µg/ml），HCC 细胞的伪 足长度增加；当 ColIV 浓度≥400 µg/ml 时，细胞伪足的长度基本不变。随着 LN 趋化剂浓度的增加（50 µg/ml~200 µg/ml ），HCC 细胞的伪足长度增加；当LN 浓度 ≥200 µg/ml 时，细胞伪足的长度基本不变。而组织胺（0.05 ng/ml~500 ng/ml ）对 肝癌细胞无趋化特性。 （2） 应用双微吸管法研究浓度不对称趋化实验中双侧伪足形成的相互影 响和趋化剂种类不同时趋化性伪足形成的强度。结果表明：一侧ColIV 浓度固定， 另一侧随着组织胺浓度升高，细胞伪足长度逐渐降低；双侧伪足一侧因组织胺趋 化浓度升高而伪足生成减弱并未使另一侧伪足生成增强。随着组织胺浓度增加 （0.5 ng/ml~50 ng/ml ）组织胺浓度为0.5 ng/ml ，5 ng/ml 和50 ng/ml 时，伪足的峰 值长度分别为3.03±0.54 µm，0.94±0.52 µm，2.07±0.55 µm 。，伪足的峰值在5 ng/ml I 重庆大学硕士论文 中文摘要 时降到最低。另侧在ColIV 浓度为200 µg/ml 趋化下伪足的长度跟单微吸管同样 浓度趋化作用下伪足长度无明显差别 。 （3） 用单微吸管法研究用细胞松弛素 D （cytochalasin D ，CD ）及钙离子 （Ca2+ ）作用于细胞后，IV 型胶原趋化作用下伪足形成的趋化过程。随着CD 浓 度的增加（0.5 µg/ml~2.0 µg/ml ），HCC 伪足长度减小，当CD 浓度为2.0 µg/ml 时，细胞伪足的长度最短；随着Ca2+浓度的增加（1 µmol/l~3.0 µmol/l），HCC 伪 足长度减小，当Ca2+浓度为3.0 µmol/l 时，细胞伪足不再形成。光镜和电镜技术 显示了细胞骨架的变化。加入2.0 µg/ml 浓度的CD 和3.0 µmol/l Ca2+化后，细胞 骨架的分配与未加入干扰剂的对照组相比，骨架大部分发生紊乱，小部分开始