Bcl-2在紫杉醇耐药胃腺癌细胞中的表达及意义-论文.pdfVIP

安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Aug；49(8) Bcl2·在紫杉醇耐药胃腺癌细胞中的表达及意义 张 丽，胡汪来，王家钰，张旭东，张林杰 摘要 目的 探讨凋亡抑制蛋 白Bcl-2在紫杉醇(TAX)耐 院上海细胞库；RPMI．1640培养基、胰酶、小牛血清、 药胃腺癌细胞中的作用。方法 采用药物浓度梯度递增持 Opti—MEM购 自美 国Gibco公司；小 鼠抗人 Bcl-2、 续作用法建立耐TAXSGC-7901细胞株，PI单染法流式细胞 Bax、mc1．1、Bc1．xl单抗购 自美国CST公司；小鼠抗 仪检测细胞凋亡率差异 ，MqT 比色法检测细胞生存率变化 ， 人B—actin单抗及辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠 Westernblot检测TAX处理后 SGC-7901普通细胞株及耐药 IgG抗体购 自北京中杉金桥公司；Bc1．2小干扰RNA 细胞株Bcl-2、mcl-1、Bax、Bc1．xl蛋 白表达 ，半定量 PCR检测 Bcl-2mRNA水平变化，流式细胞术检测Bcl-2基因沉默后的 购 自上海吉玛公司；脂质体Lipofectamine2000购 自 凋亡率变化，MTF检测细胞生存率。结果 TAX诱导胃腺 美国Invitrogen公司；TAX购 自美国百时美施贵宝公 癌细胞凋亡具有时间和剂量相关性，耐药胃腺癌细胞株对 司；B—actin及Bc1．2引物由上海生工生物公司合成。 TAX诱导的凋亡不敏感 ，TAX处理后 Westernblot检测到耐 1．2 细胞培养及药物处理 SGC_7901胃癌细胞系 药细胞株中Bcl-2表达上调，亲本细胞株Bcl-2则表达下调， 在含 10％小牛血清、1％双抗的RPMI一1640培养基， 半定量 PCR检测耐药 胃腺癌细胞株中Bcl-2mRNA水平亦 37oC、5％CO 饱和湿度下培养 。TAX溶于DMSO 上调。在耐药胃癌细胞株中沉默Bcl-2后 ，Bcl-2蛋白水平下 调，细胞凋亡率明显上升，细胞生存率显著下降。结论 配成 1mmoL／L储存液，一2O℃保存，使用前稀释成 Bcb2的表达上调可能是胃腺癌细胞对 TAX耐药的重要机 所需浓度。细胞传代后24h，PBS洗涤2次，未处理 制。 组更换新鲜培养液，药物组加入TAX，不同时间收 关键词 胃肿瘤；紫杉醇；细胞凋亡；肿瘤耐药；Bcl一2 集备用。 中图分类号 R735．2；R392．12 1．3 耐药细胞系的建立 选取对数生长期的SGC． 文献标志码 A 文章编号 1000—1492(2014)O8—1048—05 7901细胞，TAX作用浓度从0．03~mol／L开始，48h 后弃去培养液，加入新鲜培养液继续培养，观察没有 胃癌是我国常见的恶性肿瘤，化疗是 胃癌患者 明显死亡细胞后，选择对数生长期的细胞传代，并增 治疗的主要手段之一。紫杉醇 (paclitaxel，TAX)作 加25％～50％TAX药物浓度，反复传代并使之稳 为胃癌化疗的一线药物，因其在临床初始化疗缓解 定，直至该细胞株能在0．3g~mol／L的TAX浓度下 后常产生耐药性，严重影响患者治疗效果_1]。近年 长期培养生长，命名为SGC-7901／TAX。 来通过建立TAX耐药的肿瘤细胞株 探讨TAX