黑灵芝多糖的抗肿瘤活性与分子机制初探.pdf

万方数据 万方数据 摘要 摘 要 黑灵芝多糖PSG-1 是从黑灵芝子实体中提取的多糖组分，主要由木糖、 岩藻糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖等组成。大量研究表明，该多糖具有抗氧 化、提高免疫力、心肌保护、抗糖尿病、抗肿瘤、抗衰老等作用，但其抗肿 瘤作用机制方面的研究甚少，本研究旨在探讨PSG-1 的抗肿瘤作用及其分子 机制，从而为其开发为一种新型药品或功能食品提供有价值的理论依据。 本研究分别从体外和体内两种途径研究PSG-1 的抗肿瘤作用及机制。本 课题在现代分子生物学理论及技术的指导下，应用流式细胞术(Flow Cytometry, FCM) 、蛋白印迹(Western Blot) 、酶联免疫(Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA) 及逆转录- 聚合酶链式反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)等技术，分别从整体、细胞、 分子、基因水平，将PSG-1 对荷瘤小鼠的抑制肿瘤生长作用及作用通路进行 了深入研究。通过整体和离体两种途径进行研究和探讨，具体研究如下： 在体外研究中，将不同浓度的PSG-1 分别直接作用于S180、CT26 肿瘤 细胞，通过MTT 法测定PSG-1 对上述两种肿瘤细胞的增殖抑制作用，结果 发现：在体外，各剂量浓度的PSG-1 对S180、CT26 细胞的增殖抑制率无显 著性差异；这说明PSG-1 对S180 和CT26 肿瘤细胞无直接抑制增殖作用， 同时也无细胞毒性。另外，用PSG-1 预处理小鼠腹腔巨噬细胞，实验结果证 明：腹腔巨噬细胞吞噬杀伤S180 和CT26 肿瘤细胞的能力与PSG-1 浓度呈 剂量依赖性增强。说明PSG-1 能有效地活化腹腔巨噬细胞，提高其吞噬杀伤 能力。 在体内实验中，首先分别采用S180、CT26 肿瘤细胞株建立荷瘤小鼠模 型，一周左右后，接种处长出80~90 mm3 大小的肿瘤说明造模成功。然后将 小鼠进行随机分组，每天灌胃或注射给药一次。2 周后，将部分小鼠首先进 行眼眶取血，然后处死，分离出肿瘤和各组织器官；其余部分小鼠用于提取 腹腔巨噬细胞和脾细胞实验，测定细胞相应的功能活性。结果显示：与对照 组相比，PSG-1 组小鼠肿瘤抑制率随剂量升高逐渐增加，脾指数、胸腺指数 也显著增加，差异性显著(P0.05) 。此外，PSG-1 组小鼠血清中和腹腔巨噬 万方数据 摘要 细胞分泌的细胞因子和一氧化氮（NO ）均呈剂量依赖性增加；巨噬细胞的 吞噬能力也有效增强，此外PSG-1 还显著提高了T、B 淋巴细胞的增殖能力。 说明PSG-1 在体内具有很强的抑制肿瘤生长的效果，并且能通过改善荷瘤小 鼠的免疫功能，间接地起到抗肿瘤作用。 为了明确PSG-1 抗肿瘤活性的分子机制和作用途径，本实验分别从不同 的角度做了深入的研究和探讨。通过分离纯化得到荷瘤小鼠的腹腔巨噬细 胞，然后分别加入anti-TLR4 抗体、p38 MAPK 阻断剂SB203580 和NF-κB 特异阻断剂pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC)，来探讨PSG-1 抗肿瘤作用的 信号路径。结果显示：anti-TLR4 抗体能部分阻断PSG-1 诱导的促腹腔巨噬 细胞分泌TNF-α 的作用，说明TLR4 可能是PSG-1