生物化学实验理论教学课件.PPTVIP

生物化学实验理论教学课件 第一讲 分光光度计的结构与使用方法 主讲教师：徐文俊 成都大学生物工程系 2005年6月 教学目的： 教学内容： 1. 分光光度法定义与应用 2. 分光光度计的基本结构和工作原理 2.1 分光光度计的分类 2.2 分光光度计工作原理 2.2.1 分光光度计的光谱范围 2.2.2 物质的吸收光谱（1） 2.2.2 物质的吸收光谱（2） 2.2.3 物质吸光度（A）与透射比（T）的关系 2.2.4 Lambert -Beer定律（ E = εc l） 2.3 分光光度计的基本结构 分光光度计的基本部件（1）: 分光光度计的基本部件（2）: 棱镜与光栅 棱镜单色器装置示意图 检测器---光电池 检测器---光电管 检测器---光电倍增管 2.4 分光光度法的测量误差 2.4.1 仪器测量误差 2.4.2 测量条件选择 2.5 显色反应及其影响因素 2.5.1 显色反应一般要求 2.5.2 影响显色反应的主要因素 3. 7200型分光光度计的正确使用方法 3.1.1 7200型分光光度计仪器结构 3.1.2 7200型分光光度计工作原理（图） 3.1.2 7200型分光光度计工作原理（文） 3.1.3 特点 3.2 7200型分光光度计使用方法（基本操作 1） 3.2 7200型分光光度计使用方法（基本操作2） 3.2 7200型分光光度计使用方法（浓度测定） 3.3 7200型光栅分光光度计的使用注意事项（1） 3.3 7200型光栅分光光度计的使用注意事项（2） 4. UV-754型紫外-可见分光光度计正确使用方法 4.1 紫外分光光度计法概述（1） 4.1 紫外分光光度计法概述（2） 4.2 UV-754型分光光度计的结构和工作原理 4.2.2 工作原理（图） 4.2.2 工作原理（文） 4.3 UV-754型分光光度计使用方法（外型） 4.3 UV-754型分光光度计使用方法（键盘） 4.3 UV-754型分光光度计使用方法（键盘内容1） 4.3 UV-754型分光光度计使用方法（键盘内容2） 4.3.2 UV-754型紫外可见分光光度计使用方法（1） 4.3.2 UV-754型紫外可见分光光度计使用方法（2） 4.4 UV—754型紫外—可见分光光度计注意事项 思考题： 3.2.1 基本操作 （1）通电---仪器自检----预热20min； （2）用MODE键设置测试方式：透射比（T），吸光度（A），已知标样浓度方式（C）和已知标样浓度斜率（K）方式； （3）波长选择：用波长调节旋钮设置所需的单色光波长; （4）放样顺序：打开样品室盖，在1~4号放置比色皿槽中，依次放入%T校具（黑体），参比液，样品液1和样品液2。 （5）校具（黑体）校“0.000”：将%T校具（黑体）置入光路，在T方式下按“%T”键，此时仪器自动校正后显示“0.000” （6）参比液校“100”%T或“0.000”A：将参比液拉入光路中，按“0A/100%T”键调0A/100%T，此时仪器显示“BLA”，表示仪器正在自动校正，校正完毕后显示“100”%T或“0.000”A后,表示校正完毕，可以进行样品测定。 （7）样品测定：将两样品液分别拉入光路中，此时若在“T”方式下则可依次显示样品的透射比（透光度）；若在“A”方式下，则显示测得的样品吸光度。 7200型分光光度仪不仅可以测定未知样品的透射比（T）和吸光度（A）这两项基本操作，还可进行未知样品浓度测定。 （1）在已知标准溶液浓度前提下，测定未知样品浓度。 （2）在已知标准溶液浓度斜率前提下，测定未知样品浓度。 备注：以上两种浓度测定的方法请大家参照实验教学教材课后自学。 (1) 预热是保证仪器准确稳定的重要步骤。 (2) 比色皿的清洁程度，直接影响实验结果。因此，特别要将比色皿清洗干净。先用自来水将用过的比色皿反复冲洗，然后用蒸馏水淋洗，倒立于滤纸片上，待干后再收回比色皿盒中。必要时，还要对比色皿进行更精细的处理，如用浓硝酸或铬酸洗液浸泡、冲洗。 (3) 比色皿与分光光度计应配套使用，否则会引起较大的实验误差。 (4) 比色皿内盛液应为其容量的2/3，过少会影响实验结果，过多易在测量过程中