脯氨酸的检测方法.DOCVIP

脯氨酸的检测方法 1. 原理 样品用茚三酮处理，样品中的脯氨酸反应生成橙色物质，在520nm检测吸光度，并作空白对照实验。 2. 应用范围 本方法适用于蜂蜜、果汁和浓缩汁中的脯氨酸的检测。本方法在其它方面的应用必须经过个别论证。 3. 试剂及仪器 3.1脯氨酸3.2 3%茚三酮2-甲氧基乙醇溶液（0.3g茚三酮溶解于10ml 2-甲氧基乙醇，每天保持新鲜，即现用现配）3.3 2-甲氧基乙醇3.4 蚁酸(96%)，即甲酸3.5 异丙醇（2-丙醇）水溶液：水：丙醇= 1：13.6 15ml旋盖玻璃离心管（确保离心管的边缘没有缺口，将有缺口的离心管丢掉） 3.7 分光光度计，检测吸光度设定在520nm下3.8 1cm 玻璃比色皿 4. 样品准备 4.1苹果，梨和大部分浆果的果汁用单一浓度（即原果汁浓度），橙汁用1：20的水进行稀释。其它的果汁应进行适当的稀释，以保证稀释后的样品中的脯氨酸的含量低于50mg/L(见稀释表)。浓缩果汁用水稀释到单一浓度，然后再进一步进行适当的稀释。蜂蜜的稀释，采用2.5g蜂蜜加50ml水。 将样品在分析之前离心5min左右，去除悬浮物，取上清液进行分析。4.2原果汁稀释表 样品类型 稀释比例 颜色空白 期望值 Apple 苹果 1:1 yes Apricot 杏 21:1 yes Aronia 野樱莓 1:1 yes Banana 香蕉 1:1 yes Blackberry 黑莓 1:1 yes Cherry 樱桃 1:1 yes Cranberry 蔓越莓 1:1 yes Grape 葡萄 16:1 yes Grapefruit 柚子 21:1 no Guava 番石榴 3:1 yes Kiwi 泥猴桃 1:1 yes Lemon 柠檬 21:1 no Lime 酸橙 21:1 no Mandarin 中国柑桔 21:1 no Mango 芒果 1:1 yes Nectarine 油桃 21:1 no Orange 柑桔 21:1 no Papaya 番木瓜 1:1 yes Passion Fruit 西番莲 1:1 yes Peach 桃 6:1 yes Pineapple 菠萝 1:1 yes Plum 李子 7:1 yes Prune 西梅 16:1 yes Raspberry 悬钩子（树梅） 5:1 yes Strawberry 草莓 1:1 yes Tangerine 橘子 21:1 no Tomato 番茄 1:1 yes 5. 标准溶液的制备 5.1脯氨酸贮备液（500mg/L）：0.0500g脯氨酸加水定容至100ml。此贮备溶液冷藏存放，每月重新配置一次。 5.2 50mlg/L准工作溶液：每天配置一次，取5ml脯氨酸贮备溶液，用水定容至50ml。用该溶液作为分析用的标准溶液。 6. 结果判定 6.1 将离心管编号，并设计样品编号与离心管标号的对照表格。按下表，向离心管内移取相应溶液： *颜色 水 样品 空白 标准 空白茚三酮溶液 1.00 mL ------- 1.00 mL 1.00 mL2-甲氧基乙醇 ------- 1.00 mL ------- ------ 标准溶液 ------- ------- 0.50 mL ------- 样品 0.50 mL 0.50 mL ------- ------- 水 ------- ------- ------- 0.50 mL 蚁酸 0.25 mL 0.25 mL 0.25 mL 0.25 mL 6.2 深颜色的果汁或者稀释度较低的果汁中的色素物质，将会对检测结果的判定产生影响。为纠正因此产生的结果偏差，使用颜色空白对照实验。对苹果汁、梨汁、浆果汁和蜂蜜采用颜色空白对照实验。 50mg/l标准溶液的水空白对照实验用于柑橘汁及其它高稀释倍数的果汁检测。 6.3 盖紧离心管，充分摇匀（处理茚三酮时要戴乳胶手套）。同时将所有离心管放入沸水浴中加热15分钟。将离心管放在室温水浴中冷却5分钟。向每个离心管中加入5ml异丙醇水溶液（1：1）。充分混匀后，用1cm比色皿，在520nm下测量每管溶液的吸光度(