猪肺组织中差异表达基因的筛选.pdf

摘 要 目前，猪呼吸系统疾病已成为我国许多规模化猪场和农村养猪大户十分关注的问题。 猪的呼吸道疾病被认为是困扰猪场生产经营的主要问题之一，是造成最大经济损失的疾病。 猪呼吸系统疾病是多种因素综合作用的结果，除了传染性、环境以及管理因素等以外， 还包括遗传因素。对猪肺组织炎症抗性的基因表达调控和分子机制目前还不是很清楚，本研 究旨在通过分离和克隆与猪肺组织炎症抗性相关基因的探索性研究，初步揭示参与肺组织炎 症抗性的基因种类和数量，为进一步深入开展肺组织炎症抗性的分子机理研究及将来通过遗 传选择提高肺组织炎症的抗性提供理论基础。 l：本实验中首先应用抑制性消减杂交(SsH)技术成功构建了猪病变肺绸织与健康肺组织 蒡异表达cDNA文库。以大白猪为材料，通过SsH方法技术初步筛选到部分基因著异表达序 列，并将这些序列产物纯化后与pGM—TEasy载体连接，转化大肠杆菌TOPlO感受态细胞进 行文库扩增，最终构建得到了具有高消减效率的猪肺组织炎症抗性相关cDNA文库。文库扩 增后得到422个白色阳性克隆，随机挑选21个克隆进行PcR鉴定，鉴定结果表明插入片段 主要分布在150一500bp之间。 2：随后将从抑制性消减杂交过程中筛选到的初步差异表达的基因片段，经过反