《牛呼吸道疾病综合征相关病毒BVDV、BPIV3、IBRV和BRSV多重PCR检测方法的建立-论文》.pdfVIP

l2 SpecialWildEconomicAnimalandPlantResearch 特 产 研 究 文章编号：1001—4721(2014)01—0012—05 牛呼吸道疾病综合征相关病毒 BVDV、BPIV3、IBRV和 BRSV多重 PCR检测方法的建立 郭利，王炜，张淑琴，孙娜，王凤雪，武华※ (中国农业科学院特产研究所省部共建特种动物分子生物学重点实验室，长春 130112) 摘要：根据 Genbank发表的牛呼吸道综合征相关病毒中牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gB基因、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)N 基因、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5一L玎R和牛副流感3型病毒(BPIV3)N基因设计特异性引物 ，建立了在同一体系内同时对4 种病毒进行检测的多重 PCR方法。该方法可以同时检测出DNA病毒IBRV的长306bp和反转录病毒 BPIV3长422bp、BRSV长 600bp及BⅥ)、，长 13Obp的特异性片段。本项研究中以已知 IBRV、BPIV3、BRSV和 BvDV作为参考毒株，对来 自内蒙古 、辽宁、 安徽和吉林4个省、自治区的33例临床样品进行检测。结果表明，合并感染2种病毒较为多见，分别为BVDV和 BRSV共感 染，BPIV3和BRSV共感染 ，BPIV3和 IBRV共感染 ，未检测到4种病毒同时感染临床样品。 关键词：牛呼吸道综合征病毒；多重聚合酶链反应 中图分类号：Q503 文献标识码：A A multiplexPCR toDetecttheVirusesofBVDV，BPIV3，IBRV andBRSV Associated 、ththeBovineRespiratoryDiseaseComplexinClinical GUOLi，WANGWei，ZHANG Shu—qin，SUNNa，WANGFeng—xue，WU Hua※ (StateKeyLaboratoryforMolecularBiologyofSpecialEconomicAnimals，InstituteofSpecialWild EconomicAnimalsandPlnats，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Changehun130112，China) Abstract：AmultiplexPCR(mPCR)assaywasdevelopedandevaluatedforitsabilitytodetectthreeviralpathogensincludingbovineviraldiar— rheavirus，paminfluenzatype 一3virusandbovinerespiratorysyneytialvirusassociatedwiththebovinerespiratory diseasecomplex．Fourpajrs ofpfimemweredesigned，nadeachtargetproducedaspecificfragmentwithasizeof130bp(BVDV)，422bp(BPIV3)，306bp(IBRV)or600bp (BRSV)respectively．Inthisstudy，ofurwell—characteriezdviralstrainsBVDV，BPW3，IBRVandBRSVwereusedasreferencesrtains．Atthe sametime，htespecificitywasconfirmde compraedtotheotherbovineviurses．Forfieldapplication，among33clinical samplesfrom InnerMon— golia，Jilin，LiaoningnadAnhui，so—infectionbyBVDV andBRSV，CO—infectionbyBPIV3andBRSV，CO—infectionbyBPW3andIBRV wastestde ，CO—infectionbythoes four viursesisnottested． Keywords：bovinerespiratory diseasecomplex；multiplexPCR 随着我国进出口贸易和养牛业的