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2003年博士生研究生入学考试 试题名称：分子病毒学 一 名词解释（每个4分，共20分） 1 Virino ： 朊病毒是只有蛋白质而没有核酸的病毒是一种比病毒小、仅含有疏水的具有侵染性的蛋白质分子指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡蚀斑形成单位，是计量病毒（或噬菌体）的一种单位，但只限于用在有产生空斑能力的病毒。其原理是：用少量有破坏宿主细胞能力的病毒去感染已形成致密单层状态的宿主细胞群体时，经过一定培养时间使每个感染细胞周围的细胞逐渐感染崩溃，形成肉眼可见的空斑（噬菌体时可直接观察，病毒时则需借助于活体染色的方法）。在理论上，一个病毒体就可以形成一个空斑，但实际上有不同程度误差，因此不能准确的与其他计量单位互换。用PFU计量病毒的方法叫作PFU法。主要包括嵌合抗体、人源化抗体、完全人源抗体、单链抗体、双特异性抗体等。DNA限制性内切酶酶切图谱Restriction EndonucleaseAnalysis）又称DNA的物理图谱，它由一系列位置确定的多种限制性内切酶酶切位点组成，以直线或环状图式表示。在DNA序列分析、基因组的功能图谱绘制、DNA的无性繁殖、基因文库的构建等工作中，建立限制性内切酶图谱都是不可缺少的环节，近年来发展起来的RFLP(限制性片段长度多态性)技术更是建立在它的基础上“suicidal” DNA vaccine “自杀性” DNA 疫苗基于常规 DNA 疫苗和“自主复制型” RNA 疫苗( self-replicating RNAvaccine)基础上发展起来的一种新型疫苗 , 载体是以甲病毒复制子( replicon)为基础的复制型DNA 载体。不仅具有常规 DNA 疫苗易制备、运输、保存等方面的优点 ,而且还有“自主复制型” RNA 疫苗的安全性与有效性.它以甲病毒复制子为基础能诱导转染细胞自主凋亡mRNA差异显示技术（DDRT-PCR）是根据绝大多数真核细胞mRNA3端具有的多聚腺苷酸尾（polyA）结构，因此可用含oligo（dT）的寡聚核苷酸为引物将不同的mRNA反转录成cDNACpG岛(CpG island)：CpG双核苷酸在人类基因组中的分布很不均一，而在基因组的某些区段，CpG保持或高于正常概率，这些区段被称作CpG岛,在哺乳动物基因组中的1~2kb的DNA片段，它富含非甲基化的CpG双倍体。CpG岛主要位于基因的启动子和第一外显子区域，约有60％以上基因的启动子含有CpG岛。GC含量大于50%,长度超过200bp转录后基因沉默，也称为RNA干扰，是指双链RNA分子阻断或者降低同源基因的表达的现象。Bacterial Artificial Chromosome：?是基于大肠杆菌的 F 质粒构建的，高通量低拷贝的质粒载体。每个环状 DNA 分子中携带一个抗生素抗性标记，一个来源于大肠杆菌 F 因子（致育因子）的严谨型控制的复制子 oriS （ Shizuya et al. 1992 ），一个易于 DNA 复制的由 ATP 驱动的解旋酶（ （RepE） 以及三个确保低拷贝质粒精确分配至子代细胞的基因座 （ parA , parB , 和 parC ） 。 BAC 载体的低拷贝性可以避免嵌合体的产生，减小外源基因的表达产物对宿主细胞的毒副作用。人工染色体载体是利用酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）的染色体的复制元件构建的载体，其工作环境也是在酿酒酵母中。单链抗体是利用基因工程方法使抗体重链可变区(V_H)和轻链可变区(V_L)通过一段约5-25个aa的连接肽,首尾拼接而成的重组蛋白。慢病毒是逆转录病毒的一种，具有逆转录病毒的基本结构，但也有不同于逆转录病毒的组和特性，作为基因治疗载体发展起来，最近已用于转基因动物制备。是一类能在细胞间传递信息、具有免疫调节和效应功能的蛋白质或小分子多肽单克隆抗体制备的基本原理与过程 原理：B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术。过程1）免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。?2）骨髓瘤细胞的? 3）1技术上的误差常常导致融合的失败。例如，供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。2融合试验最大的失败原因是污染，融合成功的关键是提供一个干净的环境，以及适宜的无菌操作技术。