植物组织培养幻灯片3.pptVIP

一、培养基的成分 1、无机营养（大量元素、微量元素） 2、氨基酸 3、有机附加物（香蕉汁、番茄汁等） 4、维生素类 5、糖类（蔗糖） 6、琼脂 7、植物生长调节物质（IAA、CTK） 8、活性炭（吸附有毒有害物质） 二、培养基的pH ＆大多数植物要求培养基的pH为5.6 ~ 5.8 ＆用0.1 mol/L的NaOH和0.1 mol/L的HCl来调节其pH ＆pH＞6.0，培养基变硬，pH＜5.0，琼脂不容易凝固 三、常用培养基的种类、配方及其特点 （一）培养基的种类 1、根据形态，分为固体培养基、液体培养基 2、根据培养过程，分为初代培养、继代培养 3、根据作用，分为诱导培养基、增殖培养基、生根培养基 4、根据营养水平，分为基本培养基（MS、White、B5、N6等）、完全培养基 （二）几种常用培养基的配方 ＆注意单位：MS、White、N6、B5、Heller、Nitsh、Miller、SH等具体见P17-18 （三）几种常用培养基的特点 ＆MS培养基：无机盐浓度高，营养丰富 ＆White培养基：无机盐浓度低（生根培养、胚胎培养） ＆N6培养基：KNO3、（NH4）2SO4含量高，无Mo ＆B5培养基：NH4+浓度低，NO3-、盐酸硫胺素含量高（适合于木本植物） ＆SH培养基：与B5相似，不用（NH4）2SO4而用（NH4）H2PO4，矿质盐浓度较高 ＆Miller培养基：无机元素用量较MS减少1/3~1/2，微量元素种类减少，不含肌醇 四、培养基的配制 （一）母液的配制与保存 1、母液的配制 一般将母液分成大量元素、微量元素、Fe盐、维生素、氨基酸等母液；植物生长调节物质也可单独配制成母液，一般浓度为0.5 ~ 1 mg/ml； 2、母液的保存 一般将母液保存在0 ~ 5 ℃ 的冰箱内保存（分别在母液瓶上贴上标签）。 （二）培养基的配制及其灭菌 1、培养基的配制方法 将母液按顺序放入烧杯 加入生长调节物质 加琼脂 加糖 定容 熔化琼脂 调整pH 培养基分装到培养瓶中 加盖贴标签（注明培养基的名称与配制时间） 2、培养基的灭菌 条件：压力：108 kPa 温度：121 ℃ 时间：15 ~ 20 min 注意事项： 1、培养基分装时，一般占试管、三角瓶等培养容器的1/5 ~ 1/3为宜，若为塑料瓶，则培养基的厚度应为1.5 ~ 2.0 cm。 2、分装后应立即灭菌，若不及时灭菌应保存在冰箱中，24 h内完成灭菌工作。 3、生长调节物质遇热不稳定，应使用过滤灭菌法，不应进行高压灭菌。 4、培养基灭菌后，需在培养室内预培养3 d，若无污染，证明培养基可用，最好在2周内用完，最长不超过1 个月，含吲哚乙酸或赤霉素的培养基1周内使用，暂时不用的放置在10 ℃或4 ~ 5 ℃的冰箱内保存。 第三节 外植体的选择与培养 一、外植体的选择 1、选择优良的种质：材料的选择要有目的、具有一定的代表性、提高成功率、增加实用性。生长健壮、无病虫害的植株作为外植体来源。 2、选择健壮的植株：选取发育正常的器官或组织，再生能力强，组培易成功。 3、选择最适的时期： 一般按植物生长的最适时期选取材料。 4、选择合适的大小： 太大容易污染，太小，多形成愈伤组织甚至难于成活，一般在0.5 ~ 1.0 cm之间。 补充：外植体的类型 1、茎尖（园艺植物组织培养中应用最多，繁殖率高，不易发生遗传变异，但取材有限） 2、茎段（采用嫩茎的切段促进腋芽萌发，取材容易） 3、叶（幼嫩叶片组织通过愈伤组织或不定芽分化产生植株，取材容易，操作方便，但易发生变异） 4、花球和花蕾 5、种子、根、块根、块茎、花瓣等 二、外植体的灭菌 ＆组培成功与否的第一关键步骤。 ＆外植体的预处理：对外植体进行修整，去掉不要的部分，在流水下冲洗干净。 ＆外植体的表面灭菌：原则：充分灭菌，但不伤外植体；不同的外植体，灭菌的要求也不一样 常用灭菌药剂的使用和效果 补充：常用的灭菌方法 （1）茎尖、茎段及叶片等的消毒：用清洁剂清洗—75%酒精浸泡10 ~ 20 min，无菌水洗2 ~ 3次，NaClO或升汞溶液浸泡10 ~ 15 min，无菌水洗3 ~ 4次； （2）果实和种子的消毒：自来水冲洗10 ~ 30 min，70%酒精漂洗，2%NaClO液浸泡10 min，