第八章 荧光分光光度法与检测技术.pptVIP

* 第三节　应用与发展 二、荧光分析新技术 激光荧光分析 时间分辨荧光分析 同步荧光分析 胶束增敏荧光分析 三维荧光光谱分析 原油试样在环乙烷中的等角三维投影光谱图 分析化学（第2版）谢庆娟 李维斌 全国高职高专药品类专业卫生部“十二五”规划教材 * 某些物质吸收紫外-可见光后，可以发射其波长比吸收光更长的光，并且随照射光的消失而消失，这种发射光称为荧光（fluorescence）。 荧光分析法（fluorometry）是利用某些物质发射荧光的特性进行定性、定量分析的光学分析方法，又称荧光光谱法 第一节 荧光分光光度法的基本原理 * 第一节 基本原理 一、荧光的产生过程 （一）单重态与三重态 A 单重基态 B 激发单重态 C 激发三重态 * 第一节 基本原理 （二）荧光的产生 电子由激发单重态→基态单重态的跃迁 * 第一节 基本原理 （二）磷光的产生 电子由激发三重态→基态单重态的跃迁 课堂互动 您能比较荧光和磷光的主要区别吗？ * 第一节 基本原理 二、激发光谱和荧光光谱（发射光谱） * 第一节 基本原理 任何荧光物质都具有两个特征光谱： 激发光谱和荧光光谱（发射光谱） 激发光谱是当荧光波长一定时，荧光强度随激发光波长而变化的关系曲线（以激发光波长λex为横坐标，荧光的发光强度F为纵坐标的光谱）。 * 第一节 基本原理 荧光光谱是当使激发光波长和强度不变，而让物质所产生的荧光通过发射分光系统 ( II )分光，测定每一发射波长荧光强度F，以发射光波长λem为横坐标，荧光的发光强度F为纵坐标作图所得的关系曲线。 * 第一节 基本原理 三、荧光与分子结构 （一）荧光物质的特征 具有强的可见-紫外吸收，即具有K带强吸收 具有高的荧光效率 荧光效率 * 第一节 基本原理 （二）分子结构与荧光的关系 大的共轭π键结构 λex（激发） λem（激发） φF 苯 205 278 0.11 萘 286 321 0.29 蒽 365 400 0.46 四苯 390 480 0.60 * 第一节 基本原理 分子的刚性和共平面性 取代基的影响 联苯φF =0.18 芴F=1.0 * 第一节 基本原理 （三）影响荧光强度的外界因素 温度 溶剂 溶液酸碱性 荧光熄灭剂 散射光 激发光源 * 第一节 基本原理 （四）荧光分光光度计 荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和结构情况。 * 第一节 基本原理 （一）仪器类型 滤光片荧光计 滤光片-单色器荧光计 荧光分光光度计 * 第一节 基本原理 （二）荧光分光光度计的基本结构 1.光源 2. 4. 7. 9. 狭缝 3. 激发单色器 5. 样品池 6. 表面吸光物质 8. 发射单色器 10. 检测器 11. 放大器 12. 指示器 13. 记录器 * 第一节 基本原理 光源 目前最常用的是氙灯 单色器（分光系统） 激发单色器 发射单色器 样品池 测定荧光用的样品池必须用低荧光材料或石英 检测器 光电倍增管 * 第一节 基本原理 （三）仪器校准 灵敏度校准 波长校准 激发光谱和发射光谱校准 * 课堂互动 请您比较荧光分光光度计与紫外-可见分光光度计的主要区别 第一节 基本原理 * 点滴积累 荧光和磷光在实验现象上的区别：激发光停止照射时，荧光随之消失而磷光则将延续一段时间。 最强荧光波长λem和最强激发波长λex是物质的定性依据，也是定量测定时的最适宜波长。 强荧光物质的分子结构体征：一、具有长共轭结构，如芳香环、稠环或杂环；二、刚性和共平面性。 影响荧光强度的主要因素是分子结构与外界条件。 第一节 基本原理 第二节 荧光定量分析 第二节 荧光定量分析 由于荧光物质的结构不同，其吸收光的波长不同，发射出荧光的波长也不同，这就是荧光分光光度法对能产生荧光的物质进行定性分析的依据。实验证明，在稀溶液中，荧光强度与荧光物质的浓度成正比，这是荧光分光光度法对荧光物质进行定量分析的依据。 * 第二节 荧光定量分析 一、荧光强度与物质浓度的关系 当溶液中荧光物质的浓度为c，液层厚度为（吸收池内径）L时，由于荧光强度F正比于被荧光物质吸收光的强度：F∝（I0 – I），用线性方程表示为： F = K′（I0 – I） * 第二节 荧光定量分析 K′为常数，称荧光比率，其大小取决于一定条件下的荧光效率，结合比尔定律可得到下式： F = 2.303·φF·I0·ε·c·L 入射光强度I0在波长一定，光源稳定时为固定值，因此可以将2.303·φF·I0