药典附录.pptVIP

高效液相色谱法 2005版《中国药典》 天宇药业2007年4月 流程 高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由数据处理系统记录色谱信号。 洗脱分等度洗脱和梯度洗脱二种。梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀实现程序控制。色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。 适用范围 高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定，杂质检查和大分子物质的测定。有的药品需在色谱分离前或后经过衍生化反应方能进行分离或检测。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高，分析速度快的特点。 仪器组成 高效液相色谱仪由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。 对仪器的一般要求 所用的仪器为高效液相色谱仪。仪器应定期检定并符合有关规定。仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连接，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。 色谱柱  反相 非极性填充剂 常用的有C18 C8 氰基柱 氨基柱 正相：极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。 离子交换色谱：离子交换填充剂； 分子排阻色谱：凝胶或高分子多孔微球等填充剂 手性键合填充剂用于对映异构体的拆分分析。 色谱柱 填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响待测物的保留行为和分离效果。孔径在15nm（1nm=10A°）以下的填料适合于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。 色谱柱 以硅胶为载体的一般键合固定相填充剂适用pH2~8的流动相。 当pH大于8时，可使载体硅胶溶解； 当pH小于2时，与硅胶相连的化学键合易水解脱落。 当色谱系统中需使用pH大于8的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、包覆聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等； 当需使用pH小于2的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶、有机-无机杂化填充剂等。 检测器 最常用的检测器为紫外检测器UV 其他常见的检测器有二极管阵列检测器（PDAD、PAD、DAD） 荧光检测器FD 电化学检测器ECD 示差折光检测器RID 蒸发光散射检测器ELSD 质谱检测器等MSD 检测器 紫外、二极管阵列、荧光、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不仅与待测溶液的浓度有关，还与化合物的结构有关；示差折光检测器和蒸发光散射检测器为通用型检测器，对所有化合物均有响应；蒸发光散射检测器对结构类似的化合物，其响应值几乎仅与待测物的质量有关；二极管阵列检测器可以同时记录待测物在规定波长范围内的吸收光谱，故可用于待测物的光谱鉴定和色谱峰的纯度检查。 紫外、荧光、电化学和示差折光检测器的响应值与待测溶液的浓度在一定范围内呈线性关系，但蒸发光散射检测器响应值与待测溶液的浓度通常并不呈线性关系，必要时需对响应值进行数学转换后进行计算。 不同的检测器，对流动相的要求不同。如采用紫外检测器，所用流动相应至少符合紫外-可见分光光度法项下对溶剂的要求；采用低波长检测时，还应考虑有机相中有机溶剂的截止使用波长，并选用色谱级有机溶剂。蒸发光散射检测器和质谱检测器通常不允许使用含不挥发盐组分的流动相。 紫外检测器 紫外检测器是液相色谱中使用最广泛的检测器，几乎所有的液相色谱仪都配有此类检测器，是一种选择性检测器。紫外检测器灵敏度高，噪音低，线性范围宽，对流速和温度的波动不灵敏，适用于梯度洗脱及制备色谱，但是，紫外检测器只能检测有紫外吸收的物质，流动相的选择有一定限制，流动相的截止波长必须小于检测波长。 紫外检测器 工作原理：朗伯-比尔定律，即当一束单色光透过样品池时，若流动相不吸收光，则吸光度（A）与吸光组分的浓度（C）和样品池的光径长度（L）成正比。 分类：紫外检测器包括固定波长检测器，可变波长检测器和光电二极管陈列检测器三类。 紫外检测器 固定波长检测器的波长一般为254nm，以低压汞灯为光源，光源单色性好，光强度大、灵敏度高，适合于大多数芳香族、芳杂环、稠芳环类以及芳香氨基酸、核酸等的检测。 紫外检测器 可变波长检测器是目前配置最多的检测器，光路系统类似于分光光度计，一般采用氘灯或卤钨灯为光源，光束经单色器分光后按需要组分的最大吸收波长为检测波长，从而提高灵敏度。有的还具有双波长比例检测功能，可用于峰纯度检查。 二极