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2016-01-06 发布于四川
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Febr 2003 Printer HP4500PS TCVGBH1.DOC Lifetime Imaging Techniques for Optical Microscopy Wolfgang Becker, Axel Bergmann Becker Hickl GmbH, Berlin, becker@, bergmann@ 1 Contents Introduction3 Biological Applications of Lifetime Techniques 3 Fluorescence Quenching 3 Resonance Energy Transfer4 Separation of Different Chromophores 5 Diffusion in Cells 5 Microscopy Techniques6 Wide-Field Fluorescence Microscopy6 Laser Scanning Microscopy 6 Optical Near-Field Microscopy7 Light Sources 8 Titanium-Sapphire Lasers 8 Frequency Doubled Titanium-Sapphire Lasers 8 Fibre Lasers8 Pulsed Diode Lasers8 Modulated CW Lasers9 Mode-locked CW Lasers9 Pulse Pickers and Cavity Dumpers9 Detectors9 Photomultiplier Tubes (PMTs) 9 Image intensifiers 11 Avalanche photodiodes 12 Cornerstones of Fluorescence Lifetime Imaging13 Time Resolution13 Signal-to-Noise Ratio13 Detection efficiency 13 Recording efficiency 14 Sample Saturation 14 Photobleaching14 Signal Processing Techniques15 Gated Image Intensifiers 15 Modulation Techniques17 Single Channel Modulation Techniques18 Modulated Image Intensifiers20 Gated Photon Counters 23 Time-Correlated Single Photon Counting (TCSPC) 26 TCSPC Imaging 27 Multi Wavelength TCSPC Imaging29 Features of the TCSPC imaging techniques 32 Other TCSPC Techniques 35 Application of TCSPC to diffusion in cells35 TCSPC Wide Field Imaging35 Comparison of Signal Processing Techniques 36 Summary37 References38 2 Introduction Since their broad introduction in the early 90s confocal and t