南极深海底泥中性嗜盐菌Chromhalobacter+sp.NJS-2四氢嘧啶生物合成基因ectABC的克隆表达及其四氢嘧啶生物学功能初步的研究.pdfVIP

摘要 南极普里兹湾特定的地理环境和海底地形特点，能够长久保持高盐、低温、 大密度等特点，其海底沉积物的微生物往往具有适应特殊环境的生理学上的特异 性。其特定的生态环境蕴藏着独特而又极其丰富的微生物资源，其中大部分还鲜 为人知，这为研究中度嗜盐菌盐适应机制开辟了一个崭新的平台。 对普里兹湾深海沉积物中筛选到的中度嗜盐菌色盐杆菌NJS-2 (Chromoha]obacter sp．NJS一2)进行分类鉴定并分析其主要累积的相容性溶质种 类及浓度。NJS．2主要累积相容性溶质为四氢嘧啶(ectome)，其次是谷氨酸 了多对引物，以该菌株基因组DNA为模板进行PCR扩增后，经过序列测定和 终获得了一个全长2379bp的DNA片段。初步分析该片段含有编码四氢嘧啶生 物合成途径中的三个酶的基因，ectA、ectB、ectC及上下游序列。 对ectA、ectB、ectC进行克隆及诱导表达，分离纯化后得到四氢嘧啶生物合 成途径中的三个重组蛋白酶，EctA，EctB和EctC。分别加入各自底物，测定酶 活力来验证其反应方程式，从而在体外验证了该菌株四氢嘧啶生物合成途径。分 析这三个重组蛋白酶发现，具有相似的酶学性质。 四氢嘧啶在保护生物大分子上具有独特的功效，因此，我们研究了四氢嘧啶 对Cu．Zn型SOD酶在热处理条件下的保护作用。研究结果表明，四氢嘧啶对 经热处理的Cu．Zn型SOD酶有明显的保护作用。四氢嘧啶与脯氨酸、甘油、 海藻糖、谷氨酸、甜菜碱，在相同热处理条件下比较，四氢嘧啶对Cu—Zn型SOD 酶的热保护作用最为明显，且用量最少。另外，我们还分析了NJS一2在高渗环境 下诱导合成的相容性物质四氢嘧啶对微生物细胞耐热性的影响。经10％NaCl诱 导培养的耐盐细菌NJS．2，因细胞内积累了四氢嘧啶而获得耐热性。在供试的非 四氢嘧啶合成菌株的热处理体系中，外源加入四氢嘧啶，能够提高细胞的耐热性。 不同的微生物细胞在特定的处理温度下，其最佳热保护效果的四氢嘧啶添加浓度 不同。 关键词：南极，中度嗜盐菌，相容性溶质，四氢嘧啶，盐适应机制 Abstract Duetoits environmentandseafloor specificgeographical features， topography inAntarcticamaintainsa and PrydzBay hi．gh-salt，low-temperaturehigh—density environmentoffersrichmicrobial characteristics．The resources specificecological andmostofthemarestill oftenhave to to unknown．TIleyspecificphysiologyadapt the are materialsforthe of specificcircumstances．Thus，Theygood studyadaptation mechanisminmoderate halophile． Themoderate strainNJS·-2wasselectedfrom halophile PrydzBaydeep-·sea sedimentandidentified16SrDNAasChromoha]obacter of