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RNAi技术在作物品质改良中的应用 延安大学生命科学学院 陈国梁 瑞典卡罗林斯卡医学院2006年10月2日宣布，将2006年诺贝尔生理学或医学奖授予美国科学家安德鲁·法尔和克雷格·梅洛，以表彰他们发现了RNA(核糖核酸)干扰（interference ）机制。 Fire生于1959年，现在是美国斯坦福大学遗传学和病理学教授。 Mello出生1960年目前在美国马萨诸塞大学医学院任教。1998年，他们在《自然》杂志上共同发表论文宣布，他们发现了RNA具有可以干扰基因的机制。 Mello在家中接到诺贝尔奖评审委员会电话的时是当地时间4时40分左右。他感到“非常惊讶”，“到现在还没回过神来”。他说：“我有预感可能得奖，但我才45岁啊，原本以为10年或20年后才会得奖呢。” Fire在接受媒体采访时则说，获奖的感觉真是非常美妙，“一开始，我都不敢相信，它也许是个梦，或者有人搞错了，但又想这不可能。能获奖真是太棒了！” 《Science》周刊2001，2002，2003，2004年连续四年将“非编码 RNA”等评选为该年度全球科学十大进展，而2002年更将其作为进展的第一位。 然而，更加令人吃惊和兴奋的是，4年后，这项技术的始作俑者，Fire和?Mello就因此获得2006年诺贝尔医学奖。 在评审委员会的公报中称：“他们的发现澄清了许多令人迷惑和矛盾的实验结果，揭开了大自然控制遗传信息流动的一种机制，他们开创了一个崭新的研究领域” ；“像在清晨突然打开窗帘，然后一切都一目了然了” 。 这些都表明 小 RNA的研究已引起国际上的广泛关注，并且引领着生命及医学领域前沿课题的研究。小RNA的出现以及RNA干涉现象的发现重新唤起了科学家们对“RNA 世界”的重视及对“生命起源于 RNA 分子”这一命题的兴趣。 那么，什么是RNA干扰？ 1 RNAi是如何发现的？ 1.1 加深矮牵牛花的紫色 1990， Jorgensen et al； 材料：牵牛花； 目的：得到紫色更深的花； 方法：构建由强启动子启动的查耳酮合酶基因表达 载体，导入牵牛花； 结果：杂色花或花变得更白； 分析：内源和外源的查耳酮合酶基因的表达都被抑 制。称之为共抑制（co-suppression）。 1.2 提高红面包霉菌的橘色色素含量 90年代中期； 材料：红面包霉菌； 目的：提高红面包霉菌的橘色色素含量； 方法：额外转入与类胡萝卜色素生产相关之基 因，提高该基因内生存在之拷贝数； 结果：却发现大约有三分之一的霉菌无法产生 色素，呈现白色，而不是深橘色； 分析：内源和外源的基因的表达都被抑制。 1.3 阻断秀丽新小杆线虫的par-1基因 1995，Guo Su et al 材料：线虫； 目的：消除线虫第一次分裂的不对称性； 方法：利用反义技术抑制par-l的表达。同时也注入 正义RNA以期观察到基因表达的增强 ； 结果：两种方法都抑制par-l基因； 分析：这是与当时理论相矛盾，无法解释，该研究小组一直 没能给这个 意外以合理解释； 1.4 阻断秀丽新小杆线虫的par-1基因 1998，Fire et al 材料：线虫； 目的：消除线虫第一次分裂的不对称性； 方法：注射经过纯化的由T4和T7 RNA聚合酶体外转录得到的ss-RNA；注射经过纯化后的dsRNA； 结果：ss-RNA只引起微弱的抑制作用；dsRNA却得到比前者高两个数量级的抑制效果； 分析：RNA Interference(RNAi)，Nature，1998，391:806-811 ； 2 RNAi现象的普遍性 在随后的短短一年中，RNAi现象被广泛地发现于真菌、拟南芥、水螅、涡虫、锥虫、斑马鱼等大多数真核生物中。 这种存在揭示了RNAi很可能是出现于生命进化的早期阶段。随着研究的不断深入，RNAi的机制正在被逐步阐明，而同时作为功能基因组研究领域中的有力工具，RNAi也越来越为人们所重视。 3 什么是RNAi RNA干扰（RNA interference，RNAi），或称RNA干涉，是由内源性或外源性双链RNA引起的序列特异性基因沉默。小分子双链RNA能对基因的表达的不同层次进行调控，即转录水平的基因沉默（主要体现在siRNA修饰DNA分子，抑制转录的发生）和转录后水平基因沉默（主要指siRNA在mRNA水平抑制目标基因表达），来调节或关闭基因的表达，进而调控细胞的各种高级生命活动。 4 RNAi作用过程 （1）起始步骤 dsRNA的形成 dsRNA切成siRNA RNA诱导的沉默复 合物（RISC）的形成 （2）作用步