dna 提取方法相关链接.docVIP

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  • 2016-01-08 发布于安徽
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特殊组织DNA的提取及鉴定 1、提取DNA的简易方法: 1)、从全血中提取DNA:取20μl抗凝血于0.5ml无菌管中,加500μl左右的ddH2O混匀后,12000rpm离心2分钟,弃上清,(若沉淀中仍 有红细胞,需重复此操作1-2次)加入样品提取液20μl,混匀,100煮10分钟(可在扩增仪上进行)后12000rpm离心5分钟,取上清2μl进行扩增。 2)、从其它有核细胞中提取DNA:可直接加适量的样品提取液到装有发根、头屑、骨髓、精子、组织碎片等有核细胞的管中,100煮10分钟(可在扩增仪上进行)后12000rpm离心5分钟,取上清进行扩增。 2、从全血中用有机溶剂提取DNA: 1)试剂 ??a.10%SDS ??b.2.0M醋酸钠 ??c.20mg/ml蛋白酶K ??d.苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:1) ??e.分析纯乙醇 ??f.TE(10mM Tris,1.0mMEDTA溶液,Ph7.5) 2)步骤 ??A、血液样本收集于含EDTA的抽血用管子中,样品用手倒转试管混合后等分。每份700μl全血可放在1.5ml的塑料离心管中,-70储存。 ??B、在解冻的(或液体的)血液中加入800μl的TE并混匀,12000rpm离心2分钟。 ??C、吸取1.0ml上清液并弃去。 ??D、加入1.0mlTE,振荡后离心2分钟,去除尽可能多的上清液,但不要影响沉淀。 ??E、向沉淀中

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