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南京中医药大学毕业设计（论文）选题审批表 学生姓名 于曦 学号 专业/班级 设计（论文）选题名称 MCF-7固相萃取结合高效液相色谱研究当归芍药散效应物质基础 选题依据及准备情况： 针对全细胞的细胞固相萃取是从细胞膜固相萃取发展而来。细胞膜固相萃取是基于细胞与内外环境的信息传递，主要通过包括药物在内的介质与细胞膜上的受体、离子通道、酶等各种信息靶点特异性结合而实现的。多种细胞生物材料从复杂的中药及复方提取物中找到的特异性结合成分，并证实了此类成分多为效应成分。如利用红细胞为固相材料，捕获阿魏酸、洋川芎内酯H和洋川芎内酯I为特异性结合成分，利用血小板捕获具有特异性结合的原儿茶醛及许多未知成分，利用巨噬细胞捕获特异性结合的核苷类效应成分，利用肝细胞捕获多种具有生物活性的特异性结合物质，利用内皮细胞捕获香蒲新苷及芍药苷等具有效应的物质等。 指导教师意见： 指导教师签字： 年 月 日 教学院长意见： 签字： 年 月 日 细胞膜固相色谱法及其在中药活性成分筛选中的应用综述 摘要：细胞膜固相色谱法作为一种新兴的色谱技术，将药物效应成分的分离和活性筛选结合在一起，因此特别适用于中药及天然药物的物质基础研究。对细胞膜色谱技术在中药活性成分研究方面的应用做一简要综述，为该技术的进一步研究和应用提供参考。 关键词：细胞膜色谱法 药效物质基础 中药 活性成分筛选 从天然药物中寻找活性成分一直是中药研究的重要方向之一，应用分析化学技术对中药成分进行分离和分析，结合药理学的药效试验[1]，构成了中药活性成分研究的基本方法。随着科学技术的发展，各种研究技术和方法，如组分化学技术、高通量筛选技术、蛋白组学技术等的应用，大大提高了候选化合物的发现速度，对于新药的研制及开发具有重要的推动作用。 细胞膜色谱法（cell membrance chromatography,CMC）作为生命科学与色谱分离技术交叉形成的一种极具发展潜力的新兴色谱技术，是将活性组织细胞膜固定在特定载体表面，制备成细胞膜固定相，以缓冲溶液为流动相，药物为溶质添加在流动相中，利用色谱学技术研究药物与固定相之间作用规律的受体动力学新方法。该方法将药物效应成分的分离和活性筛选结合在一起，克服了先从中药中分离有效部位或单体，再研究其药效，从而使成分分离与效应脱节的弊端，因此特别适合于中药及天然药物物质基础研究。本文拟对细胞膜色谱技术近年来在中药活性成分研究方面的应用做一简要综述。 1细胞膜色谱法的原理及特点 细胞膜是由脂质双分子层构成，受体、离子通道等镶嵌在其中。细胞通过膜上的受体、离子通道等信息靶点与其他细胞、组织进行信息传递、交流、分析、综合，维持机体内外环境的平衡，实现生命活动。现代药理学研究表明，细胞膜上的受体、通道能选择性地识别药物中的化学成分并与之特异性结合，通过影响细胞内第二或第三信使分子导致一定的生物效应，最终产生药理作用。一种化合物的细胞膜通透性对于其活性起关键作用，因为绝大多数药物必须进入细胞才能表现它的活性而且还必须能透过目标细胞的细胞膜才能起作用[2]。 细胞膜色谱法利用细胞信息传递的关键部位–效应靶点，应用药物效应的产生是药物分子与生物大分子的结合激活生物信息体系而产生的观点，采用活性细胞膜特异性结合中药中的效应成分，并以色谱技术加以分析的一种新的研究中药效应成分并对此进行筛选与分离的方法，具有良好的应用前景。 2细胞膜色谱模型的建立及评价方法 目前细胞膜色谱模型的建立方法主要包括2种：一是硅胶载体细胞膜（carrier cell membrane，CCM），即以硅胶为载体，用吸附法将活性细胞膜固定在其表面，该方法最大限度地保持了细胞膜的整体性、膜受体的立体结构、周围环境和酶活性，具备普通细胞膜制剂的特性。以K+、Na-三磷酸腺苷（K+、Na+-ATP）酶作为活性指标，采用电子显微镜和表面能谱技术对硅胶CCM的表面特性进行分析，通过比较硅胶CCM与悬液细胞膜和沉淀状细胞膜的酶活性随温度、时间的变化规律和稳定性，以证明硅胶CCM与其他2种赋存状态的细胞膜一样具有可比较的酶活性特征。由硅胶CCM制成的色谱固定相，可直接用于研究药物与膜受体相互作用的特异性和立体选择性，由此得到的色谱参数对研究药物作用机制和新药开发与筛选有重要参考价值[3-5]