C型凝集素CLEC4M对HCVcc易感性的影响.pdfVIP

肝脏 2015年3月第 2O卷第 3期 ·205 · · 论 著 · C型凝集素 CLEC4M 对 HCVcc易感性的影响 朱婷 聂青和 王媛媛 高禄化 龙振昼 李汨 【摘要】 目的 利用 HCV体外培养细胞模型，观察 C型凝集素 CLEC4M 对于 HCVcc易感性的影响。方法 构建 GV166一CLEC4M慢病毒表达载体 ，脂质体转染 293T细胞 ，获取的慢病毒转染 Huh7．5细胞 ，获得稳定过表达 CLEC4M 的Huh7．5细胞系(即Huh7．5-cLEC4M)，Western印迹和RT—PCR检测CLEC4M 的过表达情况 。利用 HCVcc病毒液 感染过表达 CLEC4M 的 Huh7．5细胞系，并设置单克隆抗体干扰组及甘露聚糖干扰组，检测 CLEC4M 对 HCVce感染 性的变化 。结果 Huh7．5细胞系获得稳定过表达 的CLEC4M。Huh7．5-CLEC4M 获得对 HCVcc的高度易感性 。经 鼠抗人 CLEC4M 单克隆抗体和甘露聚糖干扰后，Huh7．5细胞的感染效率较前降低。结论 C型凝集素CLEC4M影响 细胞对 HCVcc的易感性，可能与 HCV的嗜肝性有关 。 【关键词】 c型凝集素 ；CLEC4M；HCV体外培养细胞模型；易感性 InfluenceofC-typelectindomainfamily4，memberM (CLEC4M)onthesusceptibilityofHuh7．5cellstoHCVcc ZHU Ting，NIEQing—he，WANG Yuan—yuan，LoNG Zhen—zhou，LIMi． Departmentof InfectiousDiseases， TangduHospital，theFourthM ilitaryM edicalUniversity，Xian710038，China C0rres0 gauthor：NjEQing—H8，Email：nieqinghe@163．corn [Abstract] Objective ToinvestigatetheinfluenceoftheC—typelectinCLEC4M onsusceptibilitytoHCV incell culture (HCVcc)．Methods A GV166一CLEC4M lentiviralexpressionvectorwasconstructedandtransfected into293T cellswithlipofectamine．TheHuh7．5cellswastransfectedwiththelentiviraltoestablishHuh7．5celllineswithastable CLEC4M overexpression (Huh7．5-CLEC4M )，which would be verified by reverse transcription-polymerase chain reactionand western blot．Then established Huh7．5-CLEC4M celllineswereinfected by HCVcc．M eanwhile，two interferencegroups，monoclonalantibodyinterferencegroup (treatedwithmonoclonalantibody)andmannaninterference group (treatedwithmanna)weresetup．ThechangesofCLEC4M expressionsintwointerferencegroupsweredetected． Results TheHuh7．5-CLEC4M celllinewa successfullyestablishedwith high susceptibilityto HCVcc．Comp