三七细胞中SS、DS共超表达对皂苷合成的影响.pdf

现代食品科技 ModernFoodScienceandTechnology 2015，Vo1．31，No．2 三七细胞中SS．PS共超表达对皂苷合成的影响 杨延，刘迪秋，葛锋，于钢 (昆明X_T-大学生命科学与技术学院，云南昆明 650500) 摘要：为研究三七细胞中SS，DS共超表达对皂苷合成的影响，构建了三七SS超表达载体，并以已超表达了DS的愈伤组织为 侵染材料，借助农杆菌LBA4404将 导入并整舍到三七基因组中，采用QRT-PCR法检测转基因株系中SS．DS的表达水平，香草 醛一冰醋酸一高氯酸显色法检测皂苷含量。结果显示：三株同时转 SS DS细胞系 (T-4、T-5、T-9)中，SS的相对表达量分别为仅转 DS株系的5．66、7．37、7．46倍；DS的相对表达量分别为仅转DS株系的1．39、2、1．41倍；总皂苷含量为仅转DS株系的1．7倍，普 通细胞的2．4倍；5种单体皂苷：R1、Rgl、Re、Rbl、Rd含鸯总和分别为仅转DS株系的1．33、1．61、1．71倍，普通细胞的5．62、6．81、 7．26倍；此外，Re含量出现大幅增加，达到三七药材的5~6倍。表明SS DS在皂苷生物合成途径中均起正调控作用，双基因共超 表达能进一步提高皂苷含量，揭示途径中两个甚至更多基因间可能存在正协同调控效应。 关键词：三七；鲨烯合酶；达玛烯二醇合酶；三七总皂苷；超表达 文章篇号：1673．9078(2015)2—7—13 DOI：10．13982~m．fst．1673·9078．2015．2．002 EffectsofCo--overexpressionofSqualeneSynthaseandDammarenediol--II SynthaseinPanaxnotoginsengCelis0nSaponinSynthesis YANGYan,LIUDi-qiu，GEFeng,YU Gang (FacultyofLifeScienceandTechnology，KunmingUniversiytofScienceandTechnoloyg,Kunming650500，China) Abstract：Tostudytheeffectsoftheco—overexpressionofthesqualenesynthase( anddammarenediol-IIsynthase genesinPanax notoginsengcellsonsaponinsynthesis．anoverexpressionvectorofSSderivedfrom P notoginsengwasconstructednadintegratedintothe notoginsenggenomebyculturingwihtAgrobacteriumtumefaciensLBA4404．ExpressionlevelsofSSnadDSintransgeniccelllineswere detectedusnigqunatitativereversetranscription-polymerasechainreaction(QRT-PCR)，andthesaponincontentsweredeterminedbythe vnaillin-glacialaceticacid-perchloricacidcolorimetricmethod．Theresultsshowedthatforthethreestrains(T-4，T-5，T-9)inwhichSSnadDS wereoverexpressedsimultaneously,hterelativeSSexpressionlevelswere5．66，7．37，and7．46timesrgeaterhtna thatofhtestraniwithonlyDS overexpression，andtherelativeDSexpressionlevelswere1-39，2．O0，nad1．41timesrgeaterhtanthatofthestrainoverexpressnigonlyDS．T