丙烯酰胺多克隆抗体的制备.pdf

现代食品科技 ModernFoodScienceandTechnology 2012，Voi．28，No．4 丙烯酰胺多克隆抗体的制备 王宵雪，刘冰，吕燕彦，徐小婧，方国臻，王硕 (天津科技大学食品工程与生物技术学院，教育部食品营养与安全重点实验室，天津 300457) 摘要：通过活化酯法制备了三种丙烯酰胺人工抗原并进行动物免疫，得到高效价抗体，经测定三种抗血清效价分别为 1：32000、 1：40000、1：80000。比较三种人工抗原，使用对巯基苯甲酸衍生方法获得的抗体对衍生产物表现了很高的特异性，经测定针对 1 IlL 衍生产物的抑制率达到80．7％，而针对丙烯酰胺及对巯基苯甲酸均无交叉反应。本研究为建立快速检测食品中丙烯酰胺残留的ELISA 方法奠定基础。 关键词：丙烯酰胺；人工抗原；多克隆抗体；衍生化 文章篇号：1673．9078(2012)4-405-408 PreparationofAcrylamidePolyclonalAntibodies WANGXiao-xue，LIUBing,LVYan-yan，XUXiao-jing,FAN GGuo-zhen，7：fGShuo (KeyLaboratoryofFoodNutritionandSafety，MinistryofEducationofChnia,CollegeofFoodEngineeringand Biotechnology,~anjniUniversiytofSciencenadTechnology,~anjni300457，China) Abstract：Rabbitswereimmunizedwiththreekindsofacrylamideartificialantigenswhichwere synthetizedviaactiveestermehtod,hten theantibodieswiththetitreof1：32000，1：40000nad1：8000wereobtained．Hi曲 specificnatibodywasproducedfrom acrylamidenad 3-mercaptobenzoicacid(3-MBA)．Theinhibitionrateofantibodyagainstacrylamidederivativeathteconcnetrationof1 _／ⅡlLwas80．7％，nad hterewasnocross-reactivitywiht acrylamideor3-MBA．Theresearchprovidedreferencesforhterapiddetectionofracrylamideinprocessed foodbyELISA me~od ． Keywords：acrylamide；artificialantigne ；polyclonalantibodies；derivative 含高碳水化合物的食品，经过煎、烤、炸等发生 白进行偶联。使用第3种人工抗原免疫实验动物后， 美拉德反应会产生丙烯酰胺，其含量随加工温度 的升 获得针对衍生产物特异性很高的抗体。 高而增加，对人类健康存在潜在的危害 l【】。丙烯酰胺 1 材料与方法 是一种水溶性的神经毒性物质，临床观察证明丙烯酰 胺在人体内有蓄积作用，它可引起动物致畸、致癌， 1．1 实验材料 是人类的潜在致癌物质。国际肿瘤机构 (IARC)把它 丙烯酰胺标准品、4．氨基丁酸、对巯基苯 甲酸、 认定为2A类致癌物2【，jJ。 牛血清白蛋白 (BSA)、卵清蛋白 (OVA)、N一羟基琥 丙烯酰胺残留分析多采用高效液相色谱法，该方 珀酰亚胺 (NHS)、二环己基碳二亚胺 (DCC)、酶标 法对样本净化要求高，前处理操作相对复杂且样本基 二抗、弗氏完全佐剂、弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐 质