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中学生兴趣试验：市售活性乳酸奶品质调查 安徽淮北天一中学 生物教研组 张漫漫 摘 要：面对着市面上琳琅满目的活性菌酸奶，每一个品牌都标榜含有各种有益活性菌，那我们就可以利用简单的小实验，验证一下它们的产品中是否含有活性菌或是活性菌的活性如何;丁醇对于微生物的生长有抑制作用，普通大肠杆菌对丁醇的耐受较低，在含有丁醇的培养基上其生长受到抑制；观察各种乳酸菌在丁醇环境中的生存状况来确定菌种活性。培养学生利用现有实验条件，解决实际问题 关键词：兴趣试验；活性菌；活性强弱 1 　材料与方法 1．1 　试验材料 菌种: 各种品牌的活性乳 培养基:L-B培养基，配方:蛋白胨 10g 酵母膏 5g NaCl 10g 蒸馏水 1000ml PH 7.0 液体培养基均121°C 下, 灭菌30m in 备用。 牛肉膏蛋白胨培养基，配方：牛肉膏 3g蛋白胨 10g NaCl 10g 琼脂 15~20g 水 1000ml PH 7.0 实验器材：烧杯，试管，酒精灯，培养皿，接种针，三角烧瓶，移液器，EP管，灭菌锅，玻璃棒， 1.2试验方法 1.2.1实验室各种菌种的活化 将市售的三种品牌活性乳A,B,C用移液器吸取1ūL的菌液在超净工作台无菌环境中接种到试管中的液体培养基中，盖好塞子置于37摄氏度，200r/m恒温培养12小时活化，结果菌种长势良莠不齐。将活化后的菌种同时吸取1ūL置于玻璃管中在-4摄氏度下保藏菌种。 1.2.2耐受菌的筛选 从活化的菌种中吸取A,B,C品牌中乳酸菌，并且配制固体培养基600ml，分装在三个三角烧瓶中，分别记号1，2，3瓶，并分别向三瓶中加入1%，2%，3%的丁醇。混匀后，在超净台上将其分装在玻璃培养皿中，做好标记，将三种菌种都分别接种在三个浓度丁醇培养基上，在37摄氏度下，200r/m恒温培养箱中培养12小时。记录结果如下： 表1， 1%丁醇对三种乳酸菌生长的影响 含1%丁醇培养皿 含2%丁醇培养皿 含3%丁醇培养皿 A 菌落密集，大而光滑 菌落密集菌落较大 无菌落生长 B 菌落密集且厚 菌落密集且较薄 菌落密集但数目较少 C 单菌落星状分布 局部有少量菌落 无菌落生长 结果为1%的丁醇对三种品牌的菌的生长抑制作用不明显，菌落较密集，菌落较大，较厚;2%的丁醇对三种菌的生长相对于对照组由一定的抑制作用，菌落相对稀疏，单个菌落较小;3%的丁醇对三种菌生长抑制作用最为明显，其中接种有B品牌，C品牌的培养基上无菌落。 1.2.3第二轮筛选 配制牛肉膏蛋白胨固体培养基600ml，分装在三个三角烧瓶中，分别记号1，2，3瓶，并分别向三瓶中加入1.5%，2.5%，3.5%的丁醇。混匀后，在超净台上将其分装在玻璃培养皿中，做好标记,待培养基凝固后，从含丁醇1%的选择培养基上挑取单菌落接种在含有1.5%丁醇的选择培养基上选择培养，培养条件如上。依次从2%，和3%挑取单菌落接种在含2.5%,3.5%的丁醇选择培养基，培养条件如上，12小时后 ，观察实验结果，记录如下 表2，2%丁醇对三种乳酸菌生长的影响 含1.5%丁醇培养皿 含2.5%丁醇培养皿 含3.5%丁醇培养皿 A 菌落少量且分散 无菌落生长 无菌落生长 B 无菌落生长 菌落小而分散 菌落长势旺盛密集 C 菌落分散且小 菌落未生长 无菌落生长 1.2.4第三轮筛选 配制牛肉膏蛋白胨固体培养基600ml，分装在三个三角烧瓶中，分别记号1，2，3瓶，并分别向三瓶中加入4%，4.5%，5%的丁醇。混匀后，在超净台上将其分装在玻璃培养皿中，做好标记,待培养基凝固后，从第二轮含丁醇3.5%的选择培养基上挑取单菌落接种在含有4%，4.5%，5%丁醇的选择培养基上选择培养，培养条件如上。12小时后 ，观察结果，记录如下： 表3，3%丁醇对三种乳酸菌生长的影响 含4%丁醇培养皿 含4.5%丁醇培养皿 含5%丁醇培养皿 A 有少量菌落，长势差 无菌落生长 无菌落生长 B 无菌落生长 无菌落生长 无菌落生长 C 菌落分散且小 菌落未生长 无菌落生长 1.2.5菌种的保藏 重复以上这样的筛选，以0.5%为单位递增加入的丁醇浓度，随着浓度的递增，三种大肠杆菌的生长状况受到的抑制也在逐渐加强，当丁醇浓度增加到4%时，三种大肠杆菌几乎无法在培养基上生长。直至此时菌种筛选工作结束，将在含3.5%丁醇培养基上长势良好的单菌落在超净台上进行菌种的保藏工作。 1.2.6生长曲线的测定 经过活化的A 品牌，B品牌， C品牌中乳酸菌分别接种到含有0%，1%，2.5%不同丁醇浓度的锥形瓶的液体培养中，液体培养基的体积为200ML，所取菌液量与锥形瓶中的液体培养基的体积比为1：100，培养6小时后，开始用分光光度计测定吸