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SF/SA/HAp 纤维水凝胶研究及其生物相容性 中文摘要 SF/SA/HAp 纤维水凝胶研究及其生物相容性 中文摘要 骨作为人体最大的组织器官，承担着生命活动的重要职责，我国每年因交通事故、 股骨头坏死等原因导致骨缺损的患者超过百万人，骨组织修复一直是再生医学领域的 难题和研究热点之一。临床修复过程中迫切需要具有生物相容性和生物降解性的再生 骨修复支架材料。现有研究表明丝素蛋白（SF）具有良好的生物相容性及再生加工性 能。由于人体本身是一典型的胶体系统，制备类细胞外基质结构的 SF 基水凝胶支架 用作骨修复材料成为新的研究方向。本文在研究 SF 的 silk I 结构及纤维化水凝胶的 制备方式基础上，引入海藻酸钠（SA），制备 SF/SA 纤维水凝胶，研究纤维凝胶的制 备条件及理化性能，在此研究基础上，采用仿生矿化原理，探讨纤维凝胶体系对羟基 磷灰石（HAp ）晶体生长形貌的调控；通过体外细胞培养实验，研究骨髓间充质干细 胞在纤维凝胶材料上的生长情况。 本文通过改变环境温湿度等影响因素，调控 SF 溶液的干燥速率，成功制备 SF 的 silk I 结晶结构，并建立 SF 溶液形成 silk I 结构的干燥速率方程。系统地对 silk I 结构形成影响因素进行分析，溶液浓度和干燥速率均会影响 silk I 结构的形成；silk I 结构的形成过程中伴随着 SF 分子通过氢键、亲疏水性及静电作用等形成稳定纳米纤 维网状形貌。Silk I 结构膜的性能研究结果表明：材料断面有大量的纳米纤维存在， 可在相对较低的温度条件（5 或-20 ℃）下长期保持 silk I 结构；silk I 结构膜在干态 下表现出良好的力学性能，其断裂应力为 38.68±6.21 MPa 。 以酸/盐为溶解体系溶解 SF 纤维获得再生 SF 溶液，并采用 9.3 M 溴化锂溶液再 溶解，获得 SF 水溶液，该溶液中 SF 为纳米线状形貌，且为无规卷曲结构；采用该 两步法溶解制备的 SF 溶液的凝胶过程为自上而下渐进式进行的，凝胶形成过程中 SF 分子形成纤维网状形貌的同时其结构也由无规卷曲转变成 β-sheet；此外，SF 纤维凝 胶具有良好的压缩力学性能，为类细胞外基质结构水凝胶的制备提供了前提条件。 将两步法获得的 SF 溶液与 SA 溶液共混，制备 SF/SA 纤维凝胶。研究结果表明 SA 添加量增加，会延迟胶凝时间；SF/SA 纤维凝胶中 SF 的二级结构以 β-sheet 为主， I 中文摘要 SF/SA/HAp 纤维水凝胶研究及其生物相容性  同时，纤维凝胶的力学性能随 SA 含量的增加，其压缩应力呈现下降趋势。从化学组 成和结构仿生的角度出发，以 SF/SA 纤维凝胶为矿化模板，在纤维凝胶体系中诱导 HAp 晶体的生长。实验结果表明，通过改变矿化过程中的矿化温度、矿化时间及溶 液 pH 值等影响因素，可以调控获得形貌相近的棒状 HAp 晶体。同时，运用有机基 质诱导成核理论中的静电积累-Ionotropic 模型，对纤维凝胶体系中 HAp 晶体形貌的 调控进行了探讨。 根据激光共聚焦显微镜、扫描电子显微镜及 MTT 测试结果可知，人骨髓间充质 干细胞（hMSCs ）和小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs ）在 SF 基纤维凝胶上有良好的 粘附和增殖能力。同时，SF/SA 纤维凝胶中 SA 含量的变化对 hMSCs 细胞的粘附和 增殖影响不明显。 通过本文的研究，阐明了 SF 基纤维水凝胶的制备方法及其形成机理，并发现纤 维凝胶体系能够调控棒状 HAp 晶体的生长，为制备骨组织修复材料提供了一定的实 验依据。 关键词：丝素蛋白；海藻酸钠；羟基磷灰石；水凝胶 作 者：明津法 指导教师：左保齐 教授