7原核基因表达调控345.pptVIP

7.3 色氨酸操纵子与负控阻遏系统 色氨酸操纵子的转录调控包括： （1）阻遏系统 （2）弱化系统 特点: (1) trpR和trpABCDE不连锁； (2) 操纵基因在启动子内 (3) 有衰减子(attenuator)/弱化子 (4) 启动子和结构基因不直接相连，二者被 前导序列(Leader)所隔开 7.3.1 色氨酸操纵子的阻遏系统 1.色氨酸操纵子(tryptophane operon) 负责色氨酸的生物合成。当培养基中有足够的色氨酸时，这个操纵子自动关闭，缺乏色氨酸时操纵子被打开，trp基因表达，色氨酸或与其代谢有关的某种物质在阻遏过程中起作用。 这个系统的效应物是色氨酸，是try操纵子所编码的生物合成途径的末端终产物。 2. 色氨酸的合成 色氨酸的合成分5步完成。每个环节需要一种酶，编码这5种酶的基因紧密连锁在一起，被转录在一条多顺反子mRNA上，分别以 trpE---邻氨基苯甲酸合成酶 trpD---邻氨基苯甲酸焦磷酸转移酶 trpC---邻氨基苯甲酸异构酶 trpB---色氨酸合成酶 trpA---吲哚甘油-3-磷酶合成酶 细菌中的色氨酸生物合成途径 3.色氨酸操纵子(trp)结构 包括: 调节基因（R） 启动子 （P） 操纵基因（O） 引导序列（L）及弱化子a 结构基因（E、D、C、B、A） 7.3.2 弱化子与前导肽 1.弱化子 ：在负控阻遏系统调节的基因中，起终止转录信号作用的一段核苷酸片段，称为弱化子。 DNA中可导致转录过早终止的一段核甘酸序列（123-150区）。 弱化子调控是转录调控中的微调控（或细调控）。在这个系统中，酶的浓度根据氨基酸浓度的变化而受调节。 弱化子 2. 前导肽与前导序列 前导肽是前导序列产生的一个含14个氨基酸的多肽。 前导肽对应的mRNA序列为前导序列。 前导序列在trp mRNA5/端trpE基因的起始密码前有一段长162bp的片段，称为前导区。 3. mRNA前导区分析 前导序列结构特点 易形成茎环结构，有8个U的终止信号序列 1和2区形成第二个发夹结构 3和2也形成发夹结构 有前导肽 有二个相邻色氨酸密码子（UGGUGG) 前导序列：在trp mRNA5端trpE基因的起始密码前一个长162bp的mRNA片段。 前导序列的二级结构与衰减子构象 第1种构象：较稳定构象，在离体条件下存在。 特征：1区和2区配对； 3区和4区配对，为衰减子构象。 此种构象的衰减子使后面转录提前结束。 第2种构象：在细胞内和离体均存在。 特征：2区和3区配对； 此种构象可RNA聚合酶继续转录。 前导序列二级结构 4.转录的弱化作用---衰化机制 （1）trp饥饿---抗衰减作用，即转录继续进行。 当无色氨酸存在时，核糖体在1区内的trp密码子位置停顿相当长时间，1区处于核糖体覆盖之下，不能同2区作碱基配对。但2区和3区就可以有碱基配对，迫使4区处于单链形式，不能形成二级结构的终止信号，结果RNA聚合酶就穿过衰减子区继续转录进程。 （2）非trp饥饿------转录终止 当有色氨酸存在时，核糖体能合成前导肽。核糖体伸展到2区，阻碍1区与2区的碱基配对，但3区和4区可以进行碱基配对，产生终止信号，结果RNA聚合酶就在衰减子区停止转录。 弱化子的弱化作用机制 7.3.3 trp操纵子弱化机制的实验证据 研究方法： 前导区的调节作用证据 细菌中为什么要有弱化子系统呢？一种可能是阻遏物从有活性向无活性的转变速度极低，需要有一个能更快地做出反应的系统，以保持培养基中适当的色氨酸水平。或者，弱化子系统主要是对外源色氨酸浓度做出反应。外源色氨酸浓度很低的信号虽然足以引起trp操纵子的去阻遏作用，但是这个信号还不足以很快引发内源色氨酸的合成。在这种环境下，弱化子就通过抗终止的方法来增加trp基因表达，从而提高内源色氨酸浓度。 ? 那么为什么还要有阻遏体系呢？ 目前认为阻遏物的作用是当有大量外源色氨酸存在时，阻止非必需的先导mRNA的合成，它使这个合成系统更加经济! 总结！ trp操纵子调控 trp操纵子调控方式： 1、粗调控----阻遏作用 即启动子---操纵基因系统受阻遏蛋白的负调控 。信号是细胞内的色氨酸的多少。 2、细调控----弱化作用 核糖体对mRNA前导序列L中弱化子的结合对转录终止进行调控。信号是