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HPLC的介绍及应用 HPLC用于分离： 高沸点化合物； 难挥发及热不稳定的化合物； 离子型化合物及高聚物等。 HPLC结构: 输液系统; 进样系统; 分离系统; 检测系统; 梯度洗脱装置; 数据处理系统 输液系统 流动相贮存器: 高压泵: 能提供150－450kg/cm2的压强；流速稳定，流量可以调节； 梯度淋洗装置 : 可以将两种或两种以上的不同极性溶剂，按一定程序连续改变组成，以达到提高分离效果，缩短分离时间的目的。它的作用与气相色谱中的程序升温装置类似。 进样系统 采用六通阀进样 分离部分 检测系统 紫外检测器:(常用) 根据朗伯—比尔定律，样品浓度越大，产生的信号越大. 灵敏度高，线性范围广，对温度和流速不敏感，适于梯度洗脱。 示差折光检测器 洗脱液组成的变化会使折射率变化很大，因此，这种检测器也不适用于梯度洗脱。 荧光检测器 用于检测物质本身具有荧光或无荧光物质衍生成荧光体 光电二极管阵列吸光度检测器 是同时可以得到吸光度、波长、时间——这样三维情报的检测器 一、HPLC的分离方式 1、吸附色谱 2、分配色谱 3、离子交换色谱 4、凝胶色谱 1、吸附色谱 根据填充剂吸附活性点对样品的吸收系数不同而分离 充填剂：硅胶 2、分配色谱 根据固定相与流动相的极性不同而分为 正相分配色谱和反相分配色谱 两者的区别如下图所示： 分配色谱 充填剂：多孔聚合物 ３、离子交换色谱 是根据固定相的离子交换基和样品成分中的离子性基进行交换来分离的 4、凝胶色谱 按试样中分子大小的不同来进行分离 所以又称为排斥色谱 （反筛子） 充填剂多采用：一定孔径的多孔性聚合物 不同尺寸的高聚物分子分离过程 高聚物四种平均分子量在GPC谱图中的示意图 二、LC在环保方面的应用 1、农药残留量分析 ：含氯农药 、有机磷农药 、除虫菊 2、致癌物质 ：霉素 、亚硝胺(香烟中的亚硝胺) 、苯并芘 3、水质分析 三、LC在生化方面的应用 1、蛋白质分析 2、肽类的分析 3、核酸 4、氨基酸 四、LC在药物方面的应用 1、药品的预处理：片剂，油膏，水剂等 2、体液：血、尿、脊椎液、唾液等 3、抗菌素 ：青霉素 、甾族(激素) * * 梯度洗脱装置 梯度洗脱类似GC中程序升温 流动相A、洗脱时，若样品中各成分容量因子Ｋ相差大，大的峰宽而低且分析时间长 流动相B、是溶解力强。洗脱时，各成分很快出来，则K(1.2)小的峰达不到分离 A→B 若将A、B流动相的组成随时间改变，则即分离好，又缩短分析时间. ? 固定相 流动相 正相分配 极性 非极性 反相分配 非极性 极性 高聚物的分子量及其分子量分布是高聚物结构中两个重要的参数 高聚物分子和固定相颗粒间相互作用 *