动物细胞工程课时1.ppt

动物细胞培养的条件 无菌、无毒 消毒、灭菌 抗生素 定期更换培养液，清除代谢废物 营养 糖、氨基酸、促生长因子(如维生素、激素)、无机盐、微量元素（血清、血浆） 温度和pH 36.5±0.5℃，7.2---7.4 气体 95%空气，5%CO2 植物组织培养和动物细胞培养的比较 如何大量生产单克隆抗体？ 利用淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 （4）体细胞核移植技术存在的问题 胚胎移植－动物幼体产出 概率＜10％ 克隆动物存在着健康问题 克隆动物的食品安全性问题存在争议 具有自我更新和分化发育潜能的原始细胞称为干细胞。 这部分细胞未分化或未完全分化，一旦生理需要，它们可以 按照一定的途径通过分裂、分化产生机体所需要的细胞。 造血干细胞移植： 来源：骨髓、动员后的外周血、脐带血 治疗：血液系统疾病、遗传性血液病、顽固性自身免疫性疾病、严重免疫缺陷疾病、癌症化疗与放疗后免疫低下等有效手段。 胚胎干细胞移植： 诱导出各种功能性细胞或相应的干细胞，为部分细胞坏死的病 人进行细胞移植，使病人恢复丧失的功能。 世界上第一只克隆羊“多莉”的培育过程如图所示，请据图回答： * * 常用技术 第二节 动物细胞工程 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 生产单隆抗体 其中，动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。 动物细胞培养的概念 结合教材45页图2-16“动物细胞培养过程示意图”，自主阅读教材44~45页的有关“动物细胞培养的过程”。 幼龄动物组织/胚胎 动物细胞培养的过程 剪碎 胰蛋白酶处理 细胞悬液 原代培养 贴壁生长，接触抑制，胰蛋白酶处理 传代培养 传至10代，大部分细胞死亡，剩下部分细胞 传代培养 传至50代之后，大部分细胞死亡，剩下的细胞类似癌变了（可以无限增殖，称为细胞系） 思考并回答 1.为什么选用幼龄个体的组织或动物胚胎做动物 细胞培养材料？ 2.为什么培养前要将相关组织剪碎？ 3.为什么要用胰蛋白酶处理而不是胃蛋白酶呢？ 4.胰蛋白酶会不会破坏细胞呢？ 相关概念辨析 1.原代培养：从供体获取组织后的首次培养。 2.传代培养：细胞由原代培养瓶中稀释后分装到新的培养瓶中继续培养的过程。 3.细胞株：能够传代到40~50代的细胞。 4.细胞系：能在培养条件下无限传代下去的细胞。 细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。 细胞株、细胞系 植物个体 培养结果 获得细胞或细胞分泌蛋白 快速繁殖、培育无病毒植株 培养目的 葡萄糖 动物血清 蔗糖 植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 细胞的全能性 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 蛋白质生物制品的生产 健康细胞培养 培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植 细胞的生理、药理、病理研究 获得细胞用于检测有毒物质、抗癌药物的筛选等 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等 动物细胞培养技术的应用 二、动物细胞融合（细胞杂交） 灭活的病毒：仙台病毒 疱疹病毒 新城鸡瘟病毒 物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。 1、细胞融合： 两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程 细胞核 病毒颗粒 细胞核 读下面一段文字资料，思考以下问题： 长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。 要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。 怎样才能获得单克隆抗体？ 单克隆抗体 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 特点： 特异性强、灵敏度高 2、单克隆抗体制备过程 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交细胞 细胞培养 筛选，