牛αslcasein乳腺表达载体及金属硫蛋白在转基因小鼠乳腺中的表达.pdf

中文摘要 金属硫蛋白是一类富含半胱氨酸、无芳香族氨基酸的低分子量蛋白，可分为四种亚 离子与自由基具有很高亲和力的特性使得MT在对金属离子特别是Zn2+的代谢、运输以 及自由基的清除过程中发挥着重要作用，因此在商业和医学领域有着广泛的应用，但传 统制备方法效率低、成本高的局限性限制了MT的大规模应用，因此我们借助乳腺生物 反应器技术以解决这种问题。 1．3kb鸡溶菌酶基因5’侧翼序列和2个拷贝的鸡13珠蛋白绝缘子作为去除位置效应的原 件，三者通过组合得到三种结构的表达载体plMC．MT、plC．MT、pMC．MT。 其次，采用限制性内切酶切割三个表达载体，并将得到的包含结构元件的片段通过 原核显微注射技术获得转基因鼠，在FO代鼠中经PCR和Southern 28)，pMC．MT共1只阳性母鼠(25)。 最后，对FO代和Fl代母鼠分别采集乳汁，并对F1代采集乳腺组织进行Westernblot、 RT-PCR及Real．timePCR鉴定。在蛋白水平上所有转基因鼠均未检测到MT的表达，只 的14．32倍，唯独pMC．MT-FI．25的倍数为GAPDH的14．93。 关键词t金属硫蛋白，乳腺生物反应器，牛asl酪蛋白 ¨ Abstract MTisa molecularandnon—aromaticaminoacid eysteine-rich，lowweight protein，and hasawide of inthefieldofbusiness rangeapplications andmedicine．Thetraditional methodofMT restrictedits setouttoresolvethe preparation has，however applications，we with bioreactor promblemammarygland technology． usethe ofthebovineasl-casein First，we flankingsequence gene， elementsofMT．The ofchicken -1660-1437，15628-19476，asregulatory 5’flankingsequence and thechicken two of insulatorswereusedto lysozymegene copies 13-globinprotein eliminate thecombinationofthethree obtainedthree positioneffects．Through structures，we vector expressionplMC—MT，plC—MT，pMC-MT． vectorswere restriction andthe Secondly,theexpression digestedby enzyme containthestructureelementswereusedto mice fragement generatetransgenic