第一次实习精品.pptVIP

血 常 规 检 查 中国医大一院检验科 实验要求： 掌握血常规的检测方法 掌握细胞计数板的使用 理解血常规结果的临床意义 了解血细胞的镜下形态 实验内容： 红细胞的计数 血常规的检测（半自动分析仪） 血涂片的镜下分类 血常规的结果汇报 病例讨论 实验试剂： 红细胞稀释液 ①NaCl:5g/L ②Na2SO4:12.5g/L ③氯化高汞:2.5g/L Wright-Giemsa染液 ① Wright染料:2g/L ② Giemsa染料:0.6g/L ③磷酸盐缓冲液（pH6.4-6.8） 实验器材： 无菌棉签、碘伏、采血针 试管、载玻片、 eppendorf抗凝管 显微镜 细胞计数板 血细胞分析仪 计数板的使用： 计数板侧面观 计数顺序：折线顺序计数 计数原则： 对压线的细胞“数上不数下，数左不数右” 计算： 红细胞/L =N/5×25×10×200×106 =N×1010 =N/100×1012/L 检测原理：①血细胞的非传导性质 血细胞悬浮于导电的电解质溶液中，当他们在负压的吸引下穿过一个小孔时，由于细胞的导电性质比稀释液低，会引起通过微孔的恒定电流变化，该瞬间的电阻变化产生出脉冲信号。 脉冲数转换为细胞数量；脉冲的高低与细胞体积大小成正比，经计算机处理得出各种血细胞的数量、血细胞的体积等。 检测血红蛋白原理：比色 血细胞悬液中加入溶血剂后，红细胞被破坏，释放出血红蛋白 根据流过比色孔的稀释液和血红蛋白溶液的吸光度的变化，计算出血红蛋白浓度 实验步骤： 采血 红细胞计数 自动分析仪检测 血涂片染色 血细胞镜下分类 汇报结果 实验准备： 取试管一支，准确加入红细胞稀释液2mL 载玻片1张、推片1张 eppendorf管1个 ㈠采血 用无菌棉签蘸75%酒精消毒中指或无名指指尖内侧 用采血针快速刺破皮肤，使血液自动流出，拭去第一滴血 用eppendorf管采血200ul 注意事项： 采末梢血动作要快，不要用力挤压。 血液滴入eppendorf管中，应立即混匀，防止血液凝固而影响测定结果并导致仪器堵塞 第一次实习课件.mpg 1.MSWMM ㈡红细胞计数 稀释 ①滴一滴血于载玻片上，用微量吸管准确吸取10ul。 ②擦去管尖外面多余的血液，将吸管插入稀释液底部，轻轻将血全部排除，然后吸取其上稀释液清洗吸管内残余血液2~3次。 冲池 ③混匀后，用玻棒蘸取红细胞悬液，沿盖片和计数板空隙边缘充入细胞计数池内。 计数 ④静置2~3分钟后，按计数板计数原则开始计数。 注意事项： 使用微量吸管吸取血量要准确，并要擦掉管外的血液。 充池时液量要适宜，计数区恰好充满，无气泡及多余液体溢出。 充池后不能移动盖玻片，静置2~3分钟后，开始计数。 ㈢自动分析仪检测 第一次稀释-WBC通道用 将eppendorf管置于稀释器下方，让稀释器的吸排液管插入血液中，按“START”键，此时“ASP”指示灯亮，仪器自动吸取40μl血液标本，准备一只样品杯于稀释器下方，按“START”键，此时“DIL”指示灯亮，排出9ml液体。 第二次稀释-RBC通道用 将上述装有稀释标本的样品杯置于稀释器下，如上操作，进行第二次稀释 第一次实习课件.mpg 1.MSWMM 注意事项： 每次吸样后要将吸头擦拭干净 标本稀释后应及时检测，以防细胞破坏。 血样做完，应及时倒掉。探头不做血样时，应浸泡在稀释液内，不能长期暴露在空气中或浸泡在稀释血液中。 ㈣血涂片制作 推片： 取末梢血一滴，置于载玻片一端，将推片的一端，放在血滴前面，逐渐后移接触血滴，血滴即沿推片散开，然后使推片与载玻片间成30-45度夹角，平稳向前推动至载玻片的另一端，玻片上便留下一均匀的薄层血膜。 1.MSWMM 注意事项： 血涂片要求厚薄适度： 影响片膜厚度的因素: 血滴大小、推片时夹角大小，推片速度。 血滴大、夹角过大、推片过快，会使血膜变厚，细胞簇集，影响形态观察； 反之，亦然。 ㈣血涂片制作 染色： （1）用Wright染液2-3滴覆盖整个血膜，固定细胞0.5-1min （2）直接滴加1.5～2倍的Giemsa磷酸盐缓冲液于上述Wright染液上，染色5-10min （3）用流水直接冲去染液，用滤纸吸干多余水分，即可镜检。 注意事项： 加Wright染液和Giemsa磷酸盐缓冲液后，切勿干涸，以免标本上留有染料残渣，影响形态观察。 染色完毕，要用流水直接冲去染液，不可先弃去染液后冲洗，以免留有残渣。 第一次实习课件.mpg 1.MSWMM ㈤镜下分类计数 低倍镜：在低倍镜下观察细胞着色情况，然后选择血涂片体尾交