海洋生物技术第五章海洋动物基因工程精品.pptVIP

第一节 概述 一、基因工程诞生的理论基础 二、基因工程诞生的技术突破 三、基因工程大事记 四、基因工程主要操作内容 五、基因工程的基本定义 1、基因工程内容 2、基因工程技术 3、工具酶 4、载体 5、重组DNA技术 基因工程定义 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA），转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。 一、基因工程诞生的理论基础 1、DNA是遗传物质 2、DNA 的双螺旋结构和半保留复制 3、中心法则和遗传密码子 4、不同基因具有相同的物质基础 5、基因是可以切割的 6、基因是可以转移和重组的 7、遗传密码是通用的 8、基因可以通过复制把遗传信息传给下一代 二、基因工程诞生的技术突破 1、琼脂糖凝胶电泳：1960年发明了琼脂糖凝胶电泳，可将不同长度的DNA分离开来 2、DNA连接酶：1967年三个实验室几乎同时发现了DNA连接酶。 3、限制性内切酶：1970年H.O.Smith分离出第一种限制性内切酶. 4、载体：1972年前后使用小分子量的细菌质粒和λ噬菌体做载体，在细菌细胞里大量扩增。 5、感受态体系：1970年M.Mandel和A.Higa发现经氯化钙处理的大肠杆菌容易吸收噬菌体的DNA。 6、DNA测序技术：1975年F.Sanger、A.Maxam和W.Gibert发明了DNA快速测序技术 四、基因工程主要操作内容 1、目的基因的获取：从复杂的生物基因组中，经过酶切消化和PCR扩增等步骤，分理处带有目的基因的DNA片段。（切） 2、重组体的制备：将目的基因的DNA片段插入到能自我复制并带有选择性标记的（抗菌素的抗性）载体分子上，形成DNA重组分子。（接） 3、重组体的转化：经过重组体（载体）载入适当的受体细胞中。（转） 4、扩增DNA重组分子：短时间培养转化细胞，以扩增DNA分子或使其整合到受体细胞的DNA分子中。（增） 5、筛选的转化细胞：获得使外源基因高效稳定表达的基因工程菌或细胞。（检） 部分重要的仪器设备 第二节 转基因鼠的研究方法 一、概述 二、DNA转入的方法 1、反转录病毒法 2、DNA显微注射法 3、胚胎干细胞法 一、概述 转基因动物技术始于80年代初， 1982年世界上首个转基因小鼠诞生，从此揭开了转基因动物研究的新篇章。 通过转基因技术可以人为改造动物基因组，并在动物整体水平上研究有关基因的功能。 目前,已先后建立了许多整合有外源基因的转基因小鼠和大鼠，转基因鱼、兔、猪、羊、牛等也已诞生。 转基因动物（transgenic animal）：就是指以实验方法将外源基因导入动物染色体基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。 转入基因（transgene）：导入的基因称为转入基因。 转基因技术（transgenic technology或transgenesis）：整个转基因过程。 基因转变术（Pharming）：表示利用转基因家畜在所产生的奶中生产人的药物蛋白这一想法。 转基因动物技术的应用： （1）作为人类疾病的病理模型用于遗传病等疾病的发病机理研究； （2）研究外源基因在整体动物中的表达调控规律； （3）作为药理学研究的动物模型用于寻找新的药物作用靶点和新药筛选试验； （4）利用转基因动物如牛、羊、猪等的乳腺等组织作为“生物反应器”生产极具药用价值的稀有生物活性蛋白质。 二、DNA转入的方法 就转基因技术而言，要将DNA转入鼠的基因组主要可通过三种方法来实现： 利用反转录病毒载体将外源基因转入胚胎早期细胞，然后移植到受体动物中； 利用显微注射法将DNA直接注射入受精卵的精前核中； 将基因工程改造过的胚胎干细胞导入早期胚胎中。 1、反转录病毒法 逆转录病毒侵染法是最早用来得到转基因小鼠的方法； 利用逆转录载体将遗传信息以RNA分子的形式，在逆转录整合酶和逆转录基因组末端的特异性核酸序列的作用下，反转录并整合到宿主基因组中去，最终得到转基因小鼠。 逆转录病毒感染法特点： 优点：在各种转基因方法中，逆转录病毒感染法的转基因效率是最高的，且为单拷贝随机整合。 缺点：逆转录病毒载体在设计时虽然缺失了病毒的复制功能序列，但是毒基因组可能与目的基因一起整合到同一细胞核中，就可能大量复制病毒，造成严重的污染，故不安全。此外，逆转录病毒载体容量有限，只能转移小片段DNA（≦10kb），而且逆转录病毒长末端重复的甲基化状态常使转基因的表达缺失。 2、DNA显微注射法 目前培养转基因鼠的首选方法，操作步骤如下： 首先，向供体雌鼠注射怀孕母马的血清，48小时后再注射人的绒毛膜促性腺激素，使其超量排卵，增加用于微注射接种DNA的受精卵数量。经过处理的雌鼠一