基因缺失诱变对VLDL受体结构和功能关系的初步探讨.pdfVIP

同济酱科大晕 硕士毕监论丈 基因缺失诱变对VLDL受体结构与功能关系的初步探讨 ————=-b，———～ 研究生 周华 指导老师屈伸 摘要：利用RT．PCR技术从中国人心肌组织中克隆出VLDL受体的cDNA 片段后，将其插入pcDNA3获得重组体pcD．VR。测序结果表明：这一 源于中国人的VLDL受体基因cDNA的碱基序列与文献报道基本相符， 未发现明显差异。继而，为了研究VLDL受体配体结合域各重复序列在 结合脂蛋白中的作用，在己获取的人VLDL受体cDNA基础之上，利用 基因缺失诱变策略，构建VLDL受体配体结合域重复序列l，重复序列 失体及正常VLDL受体基因导入CHO细胞。利用RT-PCR技术检测了 外源基因的表达。最后对其结合DiI标记0一VLDL的功能进行了比较。 {脂蛋白结合实验结果显示：导入pcD—VRAl—5基因的CHO细胞结合 0一VLDL的能力与导入空载体pcDNA3基因的CHO细胞结合能力无明 细胞结合0一VLDL的能力均明显高于导入空载体pcDNA3基因的CHO 导入pcD．vR基因的CHO细胞。结果表明：人VLDL受体基因在CHO 细胞能有效表达，缺失配体结合域重复序列1-5的VLDL受体基本丧失 结合脂蛋白功能，而缺失重复序列1的VLDL受体结合B_VLDL脂蛋 ≥一 白能力与正常VLDL受体无明显差异。／一一 ／。 ， 关键词VLDL受∥。基因诱麦_B．VLD亡／．结构与功能．cHo细胞N．／ 同济酱科大拳 ·砑士学业论戈． Studiesonassociation betweenthe constitutionand function of VLDL receptorbygene mutagenesis Abstract VLDLReDNAwas RT—PCR fromthe amplifiedby techniques heartcellsof theninsertedintoa Chinese，and eukaryotic vector, expression identified recombinant，named correct pcDNA3．This pcD-VR，was by disscussthe contributionof the sequencing．To of domain repeat every binding to modifiedVLDLReDNAwere ligandbinding，two constructedPeR-