土豆羧肽酶抑制剂编码基因的克隆和表达.pdf

摘要 摘要 Iflhibitor舶m 土豆羧肽酶抑制剂(carbox删dase 酸残基组成的球状多肤，近年来的研究发现其极有可能成为理想的辅助溶栓药物，以克 服目前临床溶栓药物使用过程中安全荆量过窄、容易弓f起出斑等缺陷。人血浆羧肽酶B 原(carboxypep蛀dase fiMnolvsis 制纤溶系统的启动，阻碍溶栓。cPI即通过对∞虹Ia的特异性抑制，而达到了治疗溶栓的 目的。目前获得土豆羧肽酶抑制剂主要从土纛中提取得到，分离繁琐，得率较低，来自 土豆的有毒物质龙葵素难以完全除去。也有报道通过人工合成印j基因构建分泌表达质粒 步骤多，收率低。本文研究了通过在大肠杆菌中融合表达而制备recPI的新方法。 点中，得到重组质粒pa0PI，测序后将重组质粒转化到受体蓠妇而盯f幽缸∞疗BL21中 进行表达。经37℃培养2h，在O．2 B乙21(pGCPI)可合成约占菌体总蛋白22．6％的可溶性reCPI-GST融合蛋白。 通过在摇瓶条纬下的伉纯，得翻最佳壤养帮表达条件为：13培券基中，接静量为 导5小聪进行表达。通过零因素优化实验，得到经济适用