ADAM33表量与气道平滑肌细胞生物力学属性的关系研究.pdfVIP

The Relationship Between the Expression Level of ADAM33 Protein and Airway Smooth Muscle Cell Mechanical Properties A Thesis Submitted to Chongqing University in Partial Fulfillment of the Requirement for the Master’s Degree of Engineering By Lin Feng Supervised by Prof. Deng Linhong Specialty: Biomedical Engineering College of Bioengineering of ChongqingUniversity, Chongqing, China April, 2013 中文摘要 摘 要 哮喘(Asthma)是一种常见的慢性呼吸道系统疾病，涉及环境因素与遗传因素 之间的复杂相互作用，是公认的医学难题，严重威胁着人类的生命健康。然而其 生理病理机制至今还没有得到完全地解释。有研究表明，哮喘的病理机制中包 括气道重塑(airway remodeling) ，气道炎症(Airway inflammation) 以及气道高反应 性(Airway hyperresponsiveness ，AHR)等。目前国际上公认的哮喘可能的发病机制 是，气道平滑肌细胞(Airway smooth muscle cell, ASMC) 自身生物力学属性发生改 变，当受到外界理化因素刺激时，其反应性增强导致气道高反应性与气道狭窄以 及随之而来的呼吸功能障碍。因此气道平滑肌生物力学属性变异作为此途径的终 极因素成为研究哮喘生理病理机制的重点。 近年来，通过定位克隆和全基因组筛查技术确定了去整合素碱金属蛋白酶 33(A disintegrin and metalloproteinase 33, ADAM33)是一种哮喘易感基因，且发现 ADAM33 基因与哮喘疾病特征的气道炎症和组织重构具有一定联系。然而与气道 炎症同等重要的哮喘气道病理变化是源于 ASMC 生物力学属性改变所导致的 AHR ，且已有研究表明ADAM33 在哮喘患者气道组织的间充质层包括成纤维层、 基底膜和平滑肌层上的表达水平比正常人高。由此认为在哮喘发生发展过程中 ASMC 的ADAM33 蛋白表达与ASMC 生物力学属性是否具有一定的相关性、 以及ADAM33 蛋白的表达是否参与调控ASMC 力学特性。为了解决这个问题， 本课题采用卵清蛋白(OVA)致敏新生雄性SD 大鼠构建哮喘动物模型，在此基础 上分离纯化 ASMC 在体外进行原代培养，研究哮喘病理气道中 ASMC 的 ADAM33 蛋白表达水平，及其与ASMC 生物力学行为之间的相关性，同时检测 在体外调控 ADAM33 蛋白表达后 ASMC 细胞生物力学行为的响应，研究两者 之间的关系。主要研究内容及结果如下： ① 研究了不同程度OVA 致敏雄性SD 大鼠哮喘模型ASMC 的ADAM33 蛋 白表达水平。首先将新生雄性SD 大鼠随机分为4 组，哮喘组在第 1 和第7 天时 注射含 1% OVA 和 10% Al(OH)3 的混合盐溶液，第15 天起用 1% OVA 每周雾化 3 次，分别持续4 、6 和 12 周以建立不同程度慢性OVA 致敏动物，正常对照组 动物用相同的实验方案采取同等剂量的生理盐水处理。从动物模型中分离、获 取ASMC 并在体外进行原代培养，细胞传代至2-5 代用于各项实验。当细胞长 至90%融合时，提取总蛋白，将等体积的蛋白溶液加入到 10% SDS胶中， 随后用免疫